CM-Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究

发布时间：2017-08-08 21:21

  本文关键词：CM-Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究

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【摘要】：目的建立人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)的体外培养方法,并探讨氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)与4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对HAEC进行联合标记示踪的可行性。方法运用酶消化法获取HAEC,收集第2代细胞,流式细胞仪检测CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的表达率,SP免疫化学法鉴定HAEC。CM-Dil与DAPI对HAEC进行体外标记,荧光倒置显微镜下观察1 d、7 d和14 d的标记情况,台盼蓝染色检测细胞活力,CCK-8法检测细胞增殖以明确联合标记对体外培养HAEC生长特性的影响。结果 HAEC贴壁培养后呈扁平多角形,CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的阳性率分别为99.64%、2.21%、32.41%、0.84%、36.70%,细胞角蛋白Keratin阳性表达。HAEC在CM-Dil和DAPI联合标记1 d后,荧光显微镜下可观察到细胞膜和细胞核分别在不同波长下呈红色和蓝色荧光,标记率为100%;14 d后,经传代培养的HAEC荧光强度与1 d时相近,细胞形态无改变。台盼蓝染色显示标记细胞存活率为96.8%~98.9%,CCK-8检测标记细胞的增殖力较未标记组差异无统计学意义(P0.05)。结论 CM-Dil和DAPI可有效标记HAEC,染色简单、无细胞毒性,荧光衰减较慢,可作为HAEC的标记及示踪方法。
【作者单位】： 暨南大学附属第一医院眼科;暨南大学医学院眼科研究室;
【关键词】： 人羊膜上皮细胞 氯甲基苯甲酰胺 ’ -二脒基--苯基吲哚 标记 示踪
【基金】：国家自然科学青年基金(编号:81100637) 国家自然科学基金(编号:30872808)~~
【分类号】：R329
【正文快照】： 羊膜是胎盘最内层的无血管、神经和淋巴管的透明组织,无免疫原性和致瘤性[1],且来源广泛,取材方便,无伦理学争议。现已有研究报道人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)具有类似胚胎干细胞的分化能力[2],可用作胚胎干细胞的替代物[3-4]。故将其作为种子细胞用

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本文编号：642125