外源性硫化氢调节肺炎支原体LAMPs诱生血红素氧合酶-1和促炎症细胞因子

发布时间：2017-08-09 11:10

  本文关键词：外源性硫化氢调节肺炎支原体LAMPs诱生血红素氧合酶-1和促炎症细胞因子

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【摘要】：[目的]观察外源性硫化氢(H_2S)对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)脂质相关膜蛋白(lipid-associated membrane proteins,LAMPs)诱导人单核细胞系THP-1分泌血红素氧合酶-1(heme oxygenase,HO-1)、白细胞介素6(interleukine 6,IL-6)和白细胞介素8(interleukine 6,IL-8)的影响,并探讨其调控机制,为进一步研究Mp与宿主细胞相互作用提供理论依据。[方法]体外培养Mp标准株M129,低温高速离心收集菌体并提取Mp LAMPs,用BCA法测定其浓度。体外培养THP-1细胞,用5μg/mL Mp LAMPs刺激硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)预处理和未处理的THP-1细胞,ELISA检测各组IL-6和IL-8的表达水平。Western blot检测HO-1和细胞浆、细胞核内核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor2,Nrf2)的表达水平;用Mp LAMPs分别刺激NaHS、ERK抑制剂PD98059、p38抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125和NF-κB特异性抑制PDTC预处理和未处理的的THP-1细胞,Western blot检测ERK、p38、JNK及核因子κB(NF-κB)的抑制蛋白IκB-α(inhibitor of NF-κB,IκBα)的磷酸化蛋白和总蛋白。用LAMPs刺激用Na HS和NF-κB特异性抑制PDTC预处理的THP-1细胞,ELISA检测各组IL-6和IL-8的表达。[结果](1)Mp LAMPs刺激用NaHS预处理的THP-1细胞后,HO-1的表达量比NaHS未处理组细胞增加了41.18%。IL-6和IL-8的分泌分别减少了19.02%、11.56%。(2)LAMPs诱导的NaHS预处理THP-1细胞较LAMPs直接作用的细胞Nrf2在胞浆中表达减少了16.67%,胞核内表达增加了27%。(3)Mp LAMPs刺激NaHS预处理和未处理的THP-1细胞后,NaHS处理组ERK、p38、JNK的磷酸化水平减少了27.14%、16.67%、31.00%,PD98059组、SB203580组、SP600125组分别被抑制了28%、42.5%、40.2%。(4)NaHS预处理THP-1细胞使得Mp LAMPs诱导的IκB-α的磷酸化水平降低了17.65%;LAMPs刺激用NaHS和NF-κB特异性抑制PDTC预处理的THP-1细胞,IL-6的分泌分别被抑制了24.69%、30.43%,IL-8的分泌分别被抑制了36.17%、36.25%。[结论](1)外源性硫化氢可通过抑制MAPKs/NF-κB信号途径减少Mp LAMPs诱导的THP-1细胞分泌IL-6和IL-8;(2)外源性硫化氢通过激活Nrf2的核转位促进Mp LAMPs诱导的THP-1细胞表达HO-1。
【关键词】：肺炎支原体 脂质相关膜蛋白 核因子E2相关因子2 核因子κB 硫化氢
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R375.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要缩略语英文索引9-12
• 第1章 前言12-18
• 第2章 实验材料18-22
• 2.1 主要实验仪器18-19
• 2.2 支原体菌株19
• 2.3 细胞株19
• 2.4 实验主要试剂19
• 2.5 主要抗体19-20
• 2.6 培养基及溶液配制20-21
• 2.7 其他21-22
• 第3章 实验方法22-30
• 3.1 细胞培养、传代、冻存与复苏22-23
• 3.2 Mp LAMPs的抽提，内毒素及浓度测定23-25
• 3.3 ELISA检测IL-6、IL-8 的表达水平25-27
• 3.4 Western Blot检测HO-1、Nrf2蛋白以及IκB-α、ERK、JNK、p38蛋白的磷酸化水平的表达27-30
• 第4章 实验结果30-40
• 4.1 NaHS促进肺炎支原体LAMPs诱导THP-1 细胞表达HO-130-31
• 4.2 NaHS在LAMPs诱导THP-1 细胞Nrf2核转位中起协同作用31-33
• 4.3 NaHS抑制Mp LAMPs诱导THP-1 细胞分泌IL-6 和IL-833-34
• 4.4 NaHS抑制Mp LAMPs激活THP-1 细胞中的MAPKs信号通路34-36
• 4.5 NaHS抑制Mp LAMPs诱导的THP-1 细胞IκB-α 的磷酸化并减少IL-6 和IL-8 的分泌36-40
• 第5章 讨论40-43
• 第6章 结论43-44
• 参考文献44-49
• 综述49-57
• 参考文献55-57
• 攻读硕士学位期间主要研究成果57-58
• 资助本论文的科研项目58-59
• 致谢59

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1 刘R，

本文编号：644955