稳定表达小鼠甘丙肽的N-2a细胞株的建立及内源性过表达甘丙肽对N-2a细胞增殖和凋亡的影响

发布时间：2017-08-13 11:07

  本文关键词：稳定表达小鼠甘丙肽的N-2a细胞株的建立及内源性过表达甘丙肽对N-2a细胞增殖和凋亡的影响

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【摘要】：目的建立稳定表达小鼠甘丙肽(GAL)的N-2a细胞株GAL-N-2a,探讨内源性过表达的甘丙肽对N-2a细胞增殖和凋亡的影响。方法脂质体法将重组载体PcDNA 3.1-PDGF-GAL转染N-2a细胞,通过G418筛选获得稳定过表达GAL的细胞克隆,利用PCR、反转录PCR和Western blot法检测细胞中GAL在N-2a细胞的过表达,通过MTT法检测N-2a细胞的增殖,借助流式细胞仪分别对过表达GAL的单克隆细胞进行细胞周期和细胞凋亡的检测。结果稳定转染N-2a细胞即GAL-N-2a实现GAL基因的高表达,MTT法绘制细胞生长曲线实验显示转染重组质粒PcDNA 3.1-PDGF-GAL的N-2a细胞增殖速度显著低于对照组(P0.05),相比对照组未转染正常细胞,内源性过表达的GAL能使N-2a细胞周期阻滞在G0/G1期而且对N-2a细胞凋亡有明显的促进作用。结论真核表达载体PcDNA 3.1-PDGF-GAL在转染N-2a细胞中可高表达GAL蛋白,并对N-2a细胞的增殖和凋亡均有影响,为进一步研究GAL的生物学作用奠定了基础。
【作者单位】： 山西医科大学实验动物中心;
【关键词】： N-a 甘丙肽 细胞增殖 细胞凋亡
【分类号】：R363
【正文快照】： 甘丙肽(galanin,GAL)是由29~30个氨基酸构成的神经肽,广泛分布于中枢和周围神经系统,它参加摄食、学习记忆、痛觉和神经性损伤、修复与退行性变等一系列生物活动,研究显示甘丙肽通过3种与G蛋白相偶联的受体(GalR1、GalR2、GalR3)调节一系列生物和行为学效应,在神经元发生、发

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