炎性刺激因子对小鼠骨髓间充质干细胞增殖作用的研究

发布时间：2017-08-14 18:36

  本文关键词：炎性刺激因子对小鼠骨髓间充质干细胞增殖作用的研究

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【摘要】：目的观察不同浓度的LPS、NNK对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖以及对细胞蛋白NF-κB、CUGBP1表达的影响。方法体外分离、纯化、扩增同种小鼠BMSCs,MTT法检测炎性刺激因子在不同浓度时对小鼠BMSCs增殖的影响;免疫细胞化学染色定位检测NF-κB和CUGBP1在细胞内的表达和分布;Western blot定量检测细胞蛋白NF-κB和CUGBP1的表达。结果MTT实验结果显示,不同浓度的LPS、NNK和LPS联合NNK均能促进小鼠BMSCs的增殖,其中LPS12.5μg/ml、NNK10μg/ml、LPS12.5μg/ml联合NNK10μg/ml组对小鼠BMSCs增殖的促进作用最为明显;免疫细胞化学染色结果可见在相同浓度刺激因子孵育不同时间的条件下BMSCs细胞蛋白NF-κB和CUGBP1在细胞内表达的位置不同,在LPS48小时组中,NF-κB几乎在所有的细胞核中成阳性表达,但在LPS24小时组和LPS96小时组中NF-κB在细胞核表达较少,主要表达与细胞质中。当经过LPS孵育后,CUGBP1在细胞质和细胞核中呈阳性表达,在一些细胞中主要表达于细胞核中。NF-κB在NNK48小时组的细胞中主要表达于细胞核中,在NNK24小时组和NNK96小时组主要表达于细胞质中。在NNK24小时组中,CUGBP1主要表达于细胞质中,但在NNK48小时组和NNK96小时组中CUGBP1主要表达于细胞核中。在LPS联合NNK组内,在24小时组和96小时组中,NF-κB在细胞核中的表达显著高于48小时组。在24小时组中,CUGBP1阳性细胞核数量明显高于48小时和96小时;Western blot实验结果可见NF-κB最高表达量分别出现在LPS48h,NNK24h和LPS联合NNK24h,CUGBP1最高表达量分别出现在LPS96h,NNK48h和LPS联合NNK24h。结论炎性刺激因子可能通过激活NF-κB并上调CUGBP1在细胞中的表达促进BMSCs的增殖。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 细胞增殖 NF-κB CUGBP1
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一章 实验材料9-14
• 1.1 实验动物9
• 1.2 实验试剂与仪器9-13
• 1.2.1 实验试剂一览表9-11
• 1.2.2 主要试剂配制11-13
• 1.3 实验仪器一览表13-14
• 第二章 实验方法14-19
• 2.1 小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和扩增14
• 2.2 LPS和NNK对小鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响14-15
• 2.3 各细胞内NF-κB、CUGBP1蛋白表达和分布15-16
• 2.3.1 免疫细胞化学染色15-16
• 2.3.2 免疫细胞化学染色照片分析16
• 2.4 各细胞蛋白NF-κB、CUGBP1的表达量16-18
• 2.4.1 细胞蛋白提取16
• 2.4.2 蛋白浓度测定16-17
• 2.4.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)17-18
• 2.5 抗菌多肽对 LPS 生物活性的影响18
• 2.6 统计学分析18-19
• 第三章 实验结果19-26
• 3.1 骨髓间充质干细胞的形态学特点19
• 3.2 炎性刺激因子对小鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响19-20
• 3.3 LPS、NNK和LPS联合NNK对NF-κB和CUGBP1在细胞内表达特点的影响20-22
• 3.3.1 LPS孵育NF-κB和CUGBP1蛋白细胞内表达和分布特点的影响20-21
• 3.3.2 NNK孵育NF-κB和CUGBP1在细胞内表达和分布特点的影响21
• 3.3.3 LPS联合NNK孵育NF-κB和CUGBP1在细胞内表达和分布特点的影响21-22
• 3.4 LPS、NNK和LPS联合NNK孵育对小鼠BMSCs NF-κB和CUGBP1蛋白表达量的影响22
• 3.5 抗菌多肽对 LPS 生物活性的影响22-26
• 第四章 实验分析与讨论26-29
• 结论29-30
• 缩略词表30-31
• 参考文献31-35
• 综述35-55
• 综述的参考文献44-55
• 攻读学位期间的研究成果55-56
• 致谢56-58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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2 张雪梅;熊焕章;;LPS诱导的炎症反应信号传导通路研究进展[J];中国兽医杂志;2010年07期

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本文编号：674137