ARIP1及ARIP2在Neuro-2a细胞中的表达及作用比较

发布时间：2017-08-14 16:43

  本文关键词：ARIP1及ARIP2在Neuro-2a细胞中的表达及作用比较

  更多相关文章： 激活素A 激活素受体相互作用蛋白 神经元 Neuro-2a细胞 神经递质

【摘要】：激活素(Activin)属于转化生长因子β(TGF-β)超家族成员,具有多种生物学效应。激活素受体相互作用蛋白(Activin Receptor-Interacting Protein,ARIP)是细胞内激活素信号传导蛋白,ARIP1及ARIP2属于激活素信号传导负向调控蛋白,ARIP1主要在神经细胞表达,而ARIP2组织学分布广泛。实验室前期研究发现ARIP1和ARIP2可以共存于部分神经细胞中,但ARIP1,2在同一神经细胞中的表达及作用差异仍未完全阐明;前期研究还发现激活素A可以促进神经元释放神经递质5-羟色胺(5-HT),但对其它神经递质的释放是否有影响也不清楚。因此,本研究选择原代培养海马神经元及神经母细胞瘤Neuro-2a细胞,探讨ARIP1及ARIP2在同一神经细胞中的表达和作用,同时进一步分析激活素A对神经递质释放的影响。1.ARIP1及ARIP2在体外培养海马神经元中的表达采用神经元条件培养液体外培养海马神经元,添加激活素A刺激12h及24h,结果发现,激活素A作用12h时ARIP1及ARIP2 mRNA表达较对照细胞组均升高,而激活素作用24h时ARIP1 mRNA表达明显降低,但ARIP2 mRNA表达水平仍高于对照细胞组。2.ARIP1及ARIP2在Neuro-2a细胞表达及作用比较2.1 ARIP1及ARIP2在体外培养Neuro-2a细胞的表达Neuro-2a经激活素A刺激12h及24h,结果发现,激活素A作用12h时ARIP1及ARIP2 mRNA表达升高,24h时ARIP1 m RNA表达明显降低。进一步研究发现,PMA、LPS及NGF分别处理Neuro-2a细胞12h,LPS促进ARIP1及ARIP2mRNA表达;PMA不影响ARIP1 mRNA,但促进ARIP2 mRNA表达;而NGF下调ARIP1 mRNA,不影响ARIP2 mRNA表达。2.2 ARIP1及ARIP2过表达对Neuro-2a细胞ActRII及Smads表达的影响Neuro-2a细胞分别转染ARIP1及ARIP2过表达质粒,结果显示过表达ARIP1对ARIP2 mRNA表达无明显影响,但下调Smad3,4及ActRIIA mRNA表达。而过表达ARIP2则明显下调ARIP1 mRNA表达,同时抑制Smad3,4及ActRIIA及ActRIIB mRNA表达。Western blotting检测结果显示过表达ARIP1及ARIP2均可下调Smad3及pSmad3水平,流式细胞术检测结果显示,过表达ARIP2可以显著下调细胞表面ActRIIA及ActRIIB表达。2.3 ARIP1及ARIP2过表达对Neuro-2a细胞形态及细胞活力的影响Neuro-2a细胞具有分化和增殖能力。研究采用ARIP1及ARIP2表达质粒分别转染Neuro-2a细胞,结果显示,转染过表达ARIP1质粒后细胞活力轻度下降,但与转染空质粒对照组比无统计学差异,ARIP2过表达则轻度上调细胞活力,但也无统计学差异。过表达ARIP1对Neuro-2a细胞形态无明显影响,但过表达ARIP2后不规则、有突起的细胞明显增多。3.ARIP1及ARIP2过表达对Neuro-2a细胞神经递质释放的影响实验检测了Neuro-2a细胞培养上清中的神经递质5-HT、GABA、DA、NE、Glu及Ach水平,结果发现,激活素A可以促进Neuro-2a细胞分泌5-HT、GABA、Glu,但却抑制Ach释放。过表达ARIP1及ARIP2均可抑制5HT及GABA的分泌,而对Glu无明显影响;过表达ARIP1及ARIP2对激活素上调5-HT及GLU水平作用也起了抑制作用。综上所述,ARIP1及ARIP2虽然在同一神经细胞表达,但其动态表达及作用均存在差异。激活素A不仅可以促进神经细胞5-HT释放,也能促进Glu及GABA分泌。因此,本研究为进一步阐明激活素A神经营养与保护作用及其信号传导机制奠定了研究基础。
【关键词】：激活素A 激活素受体相互作用蛋白 神经元 Neuro-2a细胞 神经递质
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 英文缩略词12-13
• 第1章 文献综述13-21
• 1.1 激活素13-14
• 1.1.1 激活素的分子特征13
• 1.1.2 激活素的信号传导13-14
• 1.2 激活素受体相互作用蛋白14-15
• 1.3 激活素与神经发育的关系15-16
• 1.4 神经递质16-19
• 1.4.1 乙酰胆碱16
• 1.4.2 谷氨酸16-17
• 1.4.3 去甲肾上腺素17
• 1.4.4 多巴胺17-18
• 1.4.5 5-羟色胺18
• 1.4.6 γ-氨基丁酸18-19
• 1.5 本课题的研究目的、内容和特色19-21
• 1.5.1 研究目的19
• 1.5.2 研究内容19-20
• 1.5.3 本课题的研究特色20-21
• 第2章 材料与方法21-30
• 2.1 实验材料21-23
• 2.1.1 细胞21
• 2.1.2 实验动物21
• 2.1.3 实验试剂21-22
• 2.1.4 主要试剂的配制22
• 2.1.5 主要实验仪器22-23
• 2.2 实验方法23-29
• 2.2.1 培养板的准备23
• 2.2.2 小鼠海马神经元培养23
• 2.2.3 RT-PCR23-26
• 2.2.4 激活素A处理Neuro-2a细胞的ARIP1, 2 mRNA检测流程26
• 2.2.5 Neuro-2a细胞瞬时转染ARIP1及ARIP2过表达质粒26-27
• 2.2.7 转染ARIP1、ARIP2过表达质粒后Neuro-2a细胞的形态学分析27
• 2.2.8 Western blotting检测p-Smad3和Smad3蛋白27-28
• 2.2.9 流式细胞术分析细胞表面激活素受体表达28
• 2.2.10 ELISA法检测神经递质28-29
• 2.3 统计学处理29-30
• 第3章 实验结果30-41
• 3.1 ARIP1及ARIP2在小鼠海马神经元的表达30-31
• 3.2 ARIP1及ARIP2在小鼠Neuro-2a细胞的表达及作用比较31-38
• 3.2.1 ARIP1及ARIP2在Neuro-2a细胞中的表达31-32
• 3.2.2 ARIP1及ARIP2过表达对Neuro-2a细胞Smads及ActRIIs mRNA表达的影响32-34
• 3.2.3 ARIP1及ARIP2过表达对Neuro-2a细胞Smad3蛋白表达的影响34
• 3.2.4 ARIP1及ARIP2过表达对Neuro-2a细胞ActRIIA及ActRIIB表达的影响34-36
• 3.2.5 ARIP1及ARIP2过表达对Neuro-2a细胞活力的影响36
• 3.2.6 ARIP1及ARIP2过表达对Neuro-2a细胞形态学变化的影响36-38
• 3.3 ARIP1及ARIP2过表达对Neuro-2a细胞神经递质释放的影响38-41
• 3.3.1 激活素A对Neuro-2 细胞神经递质释放的影响38-39
• 3.3.2 ARIP1及ARIP2过表达对Neuro-2 细胞神经递质释放的影响39-41
• 第4章 讨论41-44
• 1. ARIP1及ARIP2在组织中的表达与分布41-42
• 2. ARIP1及ARIP2在神经细胞中的表达调控42
• 3. ARIP1及ARIP2作用的差异比较42-43
• 4. 激活素、ARIP1及ARIP2过表达对神经递质释放的影响43-44
• 第5章 结论44-45
• 参考文献45-50
• 作者简介50-51
• 致谢51

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 朱晓明;王晓红;姜锋;肖西峰;尹国武;;miR-152调节JEG-3细胞中HLA-G的表达[J];中华全科医学;2011年02期

2 陈京;李雅林;路海;白波;;pEYFP-hApelin-R重组真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达[J];济宁医学院学报;2010年05期

3 高兴;邱实;蔡云;顾寿智;刘泽军;;iASPP在p53缺失肿瘤细胞中影响细胞凋亡的机制[J];第三军医大学学报;2011年01期

4 孙璇君;胡友洋;陈志武;;CSEsiRNA对EAhy926细胞的CSE及H_2S的表达影响[J];安徽医科大学学报;2012年08期

5 陈涛;唐北沙;廖小平;严新翔;张如旭;张玉虎;汤建光;曹立;郭纪锋;李静;;α-synuclein基因过度表达诱导HEK293细胞α-synuclein蛋白病理性积聚[J];中华医学遗传学杂志;2006年01期

6 蔡绍晖,杜军,陈新年,黄宁,王伯瑶;重组人beta防御素基因在COS-7细胞的转染表达[J];四川生理科学杂志;2000年02期

7 林芳;王锐;高萍;刘丽;王希;张惠中;;诱骗寡核苷酸下调MKN-45细胞OP18基因表达及对细胞增殖的影响[J];第四军医大学学报;2007年12期

8 张荣华;王冰;;哺乳动物细胞转染技术概述[J];大家健康(学术版);2013年17期

9 陈亮;辛钟成;袁亦铭;刘刚;田龙;宋卫东;姜学军;郭应禄;;Cox7a2在TM3睾丸Leydig细胞中表达,定位及与ERK1/2磷酸化相关性研究[J];临床泌尿外科杂志;2006年08期

10 朱焱;王禄增;杨威;于洋;王维;董婉维;汪瑛;秦英;郑志红;;STK15的表达对NIH3T3细胞的影响[J];中国比较医学杂志;2010年02期

中国重要会议论文全文数据库 前6条

1 司聚同;孙红;王永潮;;c-fos基因真核表达真粒构建及细胞转染[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

2 林婴;;细胞培养中野生型和突变型ELOVL4的表达:亚细胞定位及细胞多样性[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

3 郑德先;刘彦信;何亦平;刘士廉;;T淋巴细胞激活与凋亡的信号传递[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年

4 刘世洲;Simon Bekker-Jensen;Niels Mailand;Jiri Lukas;Jiri Bartek;;TopBP1与Claspin协同作用于在细胞DNA损伤中ATR介导的Chk1磷酸化[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

5 梅世月;李世博;魏绿;席真;;DNA/RNA荧光探针在示踪细胞转染过程中的应用[A];中国化学会第27届学术年会第03分会场摘要集[C];2010年

6 陈云超;;自制阳离子纳米泡介导HepG2细胞基因转染的实验研究[A];中华医学会第十三次全国超声医学学术会议论文汇编[C];2013年

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 王欣;Bmo-miR-305*等对家蚕BmSGF-1、BmFMBP-1的转录后调控[D];江苏科技大学;2015年

2 高星杰;Tudor-SN蛋白调控细胞内应激颗粒组装的分子机制[D];天津医科大学;2015年

3 刘世洲;TopBP1蛋白在细胞DNA损伤中的作用机制[D];中国医科大学;2006年

4 林晓岐;人IL-2基因的克隆及哺乳动物细胞转染的研究[D];中国协和医科大学;1991年

5 张志文;聚阳离子纳米脂质载体的制备及穿膜机理的研究[D];复旦大学;2008年

6 李媛;基于血栓调节蛋白的抗炎措施研究[D];第三军医大学;2010年

7 韩聚强;改造HBV作为肝靶向性基因治疗载体的研究[D];第三军医大学;2003年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王萌萌;miR-126-3p抑制IRS2及其在β细胞增殖调节中的作用研究[D];宁夏医科大学;2015年

2 尚敏;PRRSV非结构蛋白Nsp1α对细胞SUMO化修饰的影响[D];华中农业大学;2015年

3 胡丹;双亮氨酸基序对NOK/STYK1蛋白的表达及细胞内分布特征的影响[D];新疆农业大学;2015年

4 任莉;ARIP1及ARIP2在Neuro-2a细胞中的表达及作用比较[D];吉林大学;2016年

5 张庆慧;PAM14的细胞转染表达和定位[D];安徽医科大学;2008年

6 崔万鹏;TLR4介导的MyD88信号通路在PC12细胞氧糖剥夺导致的损伤中的作用[D];中国医科大学;2010年

7 梁宇;LPS诱导GCH1基因表达上调的机制研究[D];清华大学;2010年

8 盛艳蕊;HBV通过下调miR-101-3p促进肝癌细胞的增殖和迁移[D];重庆医科大学;2014年

9 尹长军;脂联素介导的脂肪积累调控研究[D];华中农业大学;2009年

10 闫兴;HCV NS3/4A蛋白酶抑制剂细胞筛选模型构建方法的建立[D];陕西师范大学;2012年

，

本文编号：673695