体外培养不同时间后冻存对脐血来源CIK细胞生物学活性的影响

发布时间：2017-08-18 21:22

  本文关键词：体外培养不同时间后冻存对脐血来源CIK细胞生物学活性的影响

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【摘要】：目的:观察体外培养不同时间后冻存对人脐血来源细胞因子诱导杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞增殖、免疫表型、细胞毒活性以及细胞因子分泌的影响。方法:CIK细胞在体外培养6、9、12 d后冻存1个月,复苏后培养至72 h,其间每隔24 h检测细胞增殖情况,并采用流式细胞术检测复苏后细胞免疫表型、CCK-8法检测复苏后细胞对A549细胞的杀伤活性、ELISA方法检测复苏后CIK细胞分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α的变化。结果:体外培养不同时间后冻存的CIK细胞在复苏后仍然显示出较好的增殖活性,其中,体外培养6 d后冻存组CIK细胞增殖活性明显高于体外培养9 d和12 d后冻存组CIK细胞,复苏72 h时,6、9、12 d冻存组CIK细胞数分别为(35.90±1.67)×106、(18.98±2.13)×106和(11.76±2.12)×106个(P0.01)。体外培养6、9、12 d后冻存组CIK细胞复苏24 h后,各冻存组CD3+CD56+、CD3+CD8+细胞比例逐渐增加,且复苏72 h后6 d冻存组CIK细胞中CD3+CD56+和CD3+CD8+细胞比例最低。体外培养后冻存组CIK细胞在复苏24 h内对A549细胞的杀伤活性较低,但24 h后细胞毒活性有较大幅度的增加,且体外培养12 d后冻存组CIK细胞对A549细胞的杀伤活性高于6 d和9 d冻存组CIK细胞,如复苏后72 h,12、6、9 d冻存组CIK细胞对A549细胞的抑瘤率分别为(0.81±0.09)%、(0.59±0.06)%、(0.42±0.08)%(P0.01)。ELISA检测结果显示,随着复苏时间的延长,体外培养不同时间后冻存的CIK细胞分泌IFN-γ和TNF-α的水平也逐渐上升;复苏72 h时,体外培养6 d后冻存组CIK细胞分泌IFN-γ的量要高于其他组,而体外培养12 d后冻存组TNF-α的分泌量则明显高于其他组。结论:体外培养不同时间后冻存对CIK细胞的生物学活性有一定影响,但复苏后经短时间培养后基本恢复,提示CIK细胞可以在培养至12 d后进行冻存。
【作者单位】： 成都清科生物科技(集团)有限公司;四川大学基础医学与法医学院;
【关键词】： 细胞因子诱导杀伤细胞 冻存 细胞毒活性 免疫表型
【分类号】：R392
【正文快照】： 细胞因子诱导杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞是在体外利用多种细胞因子刺激诱导单个核细胞而获取的异质性细胞群,自1991年Schmidt-Wolf等[1]成功培养之后,CIK细胞以其培养简单、扩增速度快、杀瘤活性高、使用安全等特点,越来越广泛地应用于肿瘤的生物治疗中[2-5]。在

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本文编号：696851