1个新的白介素-32剪接异构体的克隆与表达

发布时间：2017-08-20 12:32

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【摘要】：目的对白介素-32(interleukin-32,IL-32)的不同剪接异构体进行克隆及表达。方法设计保守引物,以Jurkat细胞的cDNA为模板进行PCR扩增,克隆IL-32不同剪接异构体;DNA测序扩增产物,计算机辅助分析IL-32基因序列特征;构建IL-32原核及真核表达重组质粒,并利用SDS-PAGE和Western blot检测其表达情况。结果克隆得到已知的IL-32的6个剪接异构体(α、β、γ、δ、ε、ζ),还克隆得到1个新的IL-32剪接异构体,将其命名为IL-32η,Genbank登录号JN546102。IL-32η编码区长度为336 bp,编码的蛋白含111个氨基酸残基,其理论相对分子质量为12 560。IL-32η原核表达产物主要以可溶形式位于宿主菌的周质腔。亲和纯化了重组IL-32η,利用重组IL-32η制备了兔多克隆抗体,该抗体能够识别IL-32全部的7个剪接异构体。结论克隆得到1个新的IL-32剪接异构体IL-32η,它的发现将为全面理解IL-32的功能提供新思路。
【作者单位】： 南通大学医学院病原生物学系;
【关键词】： 白介素- 剪接异构体 原核表达 真核表达
【基金】：江苏省高校自然科学基金(11KJB310008) 南通市科技计划项目(K2010035) 南通大学自然科学预研项目(10ZY009)
【分类号】：R346
【正文快照】： 白介素-32(interleukin-32,IL-32)是新近报道的促炎症细胞因子,其主要来源是T淋巴细胞、NK细胞、单核细胞及上皮细胞等[1-2]。编码IL-32的基因位于人染色体16p13.3,包括8个外显子[3]。最初报道,IL-32有4种不同的剪接异构体,包括IL-32α、IL-32β、IL-32γ、和IL-32δ[1]。此后

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