人同源异形盒基因HOXB9多克隆抗体的制备和活性鉴定

发布时间：2017-08-21 19:47

  本文关键词：人同源异形盒基因HOXB9多克隆抗体的制备和活性鉴定

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【摘要】：目的制备兔抗人同源异形盒基因HOXB9的多克隆抗体,为后续深入研究HOXB9蛋白的功能提供工具。方法采用聚合酶链反应(PCR)和DNA重组技术,构建HOXB9基因5'端7-458碱基片段到原核表达载体pGEX-4T-1和pMal-C2x中,热休克法转化及异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达谷胱甘肽转移酶标签的HOXB9 N端融合蛋白和麦芽糖结合蛋白标签的HOXB9 N端融合蛋白。纯化GST-HOXB9 N端融合蛋白免疫新西兰白兔,ELISA鉴定效价后,颈动脉放血,收集血清,纯化抗体。免疫印迹法及免疫沉淀法鉴定抗体有效性及特异性。结果本实验制备的抗体能够特异识别目标分子的单一条带,并且具有较强的免疫沉淀天然构象的HOXB9蛋白的能力;采用所制备的抗体检测发现,HOXB9蛋白在小鼠免疫器官、胰脏、结肠、肺、小脑、雌性生殖系统及睾丸中表达较高,其他器官表达较低或无表达。结论成功制备了特异而有效的兔抗人HOXB9蛋白多克隆抗体,此多克隆抗体可用于免疫印迹法分析及免疫沉淀实验。
【作者单位】： 北京大学基础医学院组织学与胚胎学教研室;
【关键词】： HOXB 纯化蛋白 多克隆抗体 免疫印迹法 新西兰白兔
【基金】：教育部博士点基金资助项目(20100001110046) 国家自然科学基金资助项目(30830048) 北京市与中央在京高校共建项目
【分类号】：R392
【正文快照】： Homeobox B9(HOXB9)基因是同源异形盒基因(homoeobox gene)家族的一个成员,定位于第17号染色体的17q21.3区,cDNA全长753个碱基对,编码含250个氨基酸序列的蛋白质,相对分子质量约为28kD。HOXB9蛋白主要由两个结构域构成:Hox9_activation_N结构域和Homeodomain结构域,蛋白一级结

【相似文献】

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1 吴晓波;;同源异形盒基因是造血细胞分化的一种潜在性调节因子[J];生理科学进展;1989年02期

2 宋自芳;同源异形盒基因与肿瘤[J];国外医学(肿瘤学分册);2003年03期

3 ;[J];;年期

，

本文编号：714798