H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白-1真核表达载体的构建与表达

发布时间：2017-08-21 20:04

  本文关键词：H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白-1真核表达载体的构建与表达

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【摘要】：目的:构建甲型H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体并转染293T细胞以表达其编码的蛋白。方法:从南京分离株H7N9流感病毒[A/Nanjing/1/2013(H7N9)]提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T载体中构建pMD18-T-NS1质粒,以pMD18-T-NS1质粒为模板扩增NS1基因。双酶切NS1基因PCR产物与PXJ40-MYC后,连接构建真核表达载体PXJ40-MYC-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定NS1蛋白的表达。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功。Western blot法可见NS1基因编码蛋白的成功表达。结论:成功构建了H7N9非结构蛋白NS1真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1蛋白的细胞模型和NS1蛋白功能研究奠定基础。
【作者单位】： 江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所 卫生部肠道病原微生物重点实验室;
【关键词】： HN亚型禽流感病毒 NS 真核表达 免疫印迹
【基金】：国家科技重大专项(2012ZX10004-210-004)
【分类号】：R373
【正文快照】： 禽流感(avian influenza,AI)是由禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起的一种禽类感染和(或)疾病综合征。根据AIV致病力的差异,将其分为高致病性禽流感(highly pathogenic avian influen-za,HPAIV,如H5N1)和低致病性禽流感(lowpathogenic avian influenza,LPAIV,如H9N2)

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