融合蛋白LTβR-Fc对卵清蛋白诱发的皮炎小鼠模型的影响

发布时间：2017-08-23 20:38

  本文关键词：融合蛋白LTβR-Fc对卵清蛋白诱发的皮炎小鼠模型的影响

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【摘要】：特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)是一种T细胞介导的慢性复发性炎症性皮肤病,常伴发哮喘、过敏性鼻炎和结膜炎等一系列症状,以剧烈瘙痒和睡眠障碍为主要特征。其发病机制尚不明确,目前认为T细胞免疫异常在AD的发病环节中扮演了重要角色,AD的发病、皮损的持续存在与T淋巴细胞的过度活化以及产生的细胞因子功能异常有关。共刺激分子在T淋巴细胞活化过程中起着至关重要的作用。研究中针对其受体-配体结合的阻断策略既可用于急性移植免疫排斥反应的预防,也可用于自身免疫抑制的维持。单纯疱疹病毒侵入介质配体(herpesvirus entry mediator ligand,HVEML,或称LIGHT)是新近发现的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)配体超家族的一员,它参与许多炎症性疾病的发病过程,其受体一般表达于活化的T淋巴细胞,属于单纯疱疹病毒侵入介质(herpesvirus entry mediator,HVEM)。研究证实,LIGHT共刺激分子参与了炎症性肠疾病、强直性脊柱炎与类风湿性关节炎等疾病的发病进程,而特应性皮炎患者外周血血清中LIGHT的表达水平较健康者显著上调,且与患者血清内IgE的水平以及湿疹面积与严重度指数(eczema area and severity index,EASI)显著相关。因此,本研究拟探讨单纯疱疹病毒侵入介质配体信号通路LIGHT-HVEM阻断抗体LTβR-Fc融合蛋白对卵清蛋白诱发的皮炎小鼠模型的影响,以进一步探索LIGHT-HVEM信号通路在AD发病机制中的作用。第一部分IL-4、IL-5和IFN-γ在皮炎小鼠模型中的表达【目的】检测LIGHT-HVEM阻断抗体LTβR-Fc融合蛋白建立的皮炎小鼠模型皮损处及脾细胞上清液内白介素(IL)-4、IL-5和干扰素γ(IFN-γ)的表达,并分析LIGHT-HVEM信号通路在AD发病机制中的作用。【方法】将BALB/c小鼠随机分为空白对照组(以100μl生理氯化钠溶液进行刺激)、模型组(将100μg卵清蛋白溶于100μl生理氯化钠溶液中进行刺激)以及阻断剂组(在卵清蛋白致敏前24 h将100μg LTβR-Fc溶于100μl生理氯化钠溶液作为阻断药物进行刺激),于造模结束时处死各组小鼠,用rt-pcr法检测小鼠皮损处il-4、il-5和ifn-γ的mrna表达情况,用elisa法检测小鼠脾细胞上清液内il-4、il-5和ifn-γ的蛋白表达情况。【结果】融合蛋白ltβr-fc显著抑制了卵清蛋白诱发的皮炎小鼠模型的炎症反应。皮炎小鼠模型组与阻断剂组小鼠皮损处il-4mrna(1.81±0.25vs0.88±0.25)、il-5mrna(1.24±0.26vs0.75±0.15)、ifn-γmrna(1.11±0.19vs0.62±0.09)水平差异具有统计学意义(p0.05),脾细胞上清液内il-4蛋白[(20.12±5.39)ng/lvs(9.58±1.44)ng/l]、il-5蛋白[(22.77±4.07)ng/lvs(11.37±2.02)ng/l]、ifn-γ蛋白[(23930±44.20)ng/lvs(16167±950.40)ng/l]水平差异亦具有统计学意义(p0.05)。【结论】融合蛋白阻断抗体ltβr-fc通过阻断light-hvem信号通路可以显著下调卵清蛋白诱发的皮炎小鼠模型的il-4、il-5和ifn-γ,提示light-hvem可以作为特应性皮炎的潜在治疗靶点。第二部分皮炎小鼠模型血清中总ige、igg1以及卵清蛋白特异性ige、igg1的表达水平【目的】评估light-hvem阻断抗体ltβr-fc融合蛋白建立的皮炎小鼠模型的湿疹面积与严重度指数(eczemaareaandseverityindex,easi),并检测皮炎小鼠模型血清中总的以及卵清蛋白特异性的ige、igg1的表达,分析light-hvem信号通路在ad发病机制中的作用。【方法】将balb/c小鼠随机分为空白对照组(以100μl生理氯化钠溶液进行刺激)、模型组(将100μg卵清蛋白溶于100μl生理氯化钠溶液中进行刺激)以及阻断剂组(在卵清蛋白致敏前24h将100μgltβr-fc溶于100μl生理氯化钠溶液作为阻断药物进行刺激),在开始致敏后第0、4、8、12、15、20、23、27、31、34天分别对各组实验小鼠进行病情严重程度评分,同时测量皮损面积大小,最后于造模结束行眼眶取血,提取血清后处死各组小鼠,用elisa方法检测血清内总的ige、igg1以及卵清蛋白特异性的ige、igg1的表达水平。【结果】融合蛋白ltβr-fc显著抑制了卵清蛋白诱发的皮炎小鼠模型的炎症反应。与模型组相比,阻断剂组小鼠皮损面积显著减少(P0.05),EASI明显降低(P0.05)。皮炎小鼠模型组与阻断剂组血清内总的IgE[(32277.00±407.53)μg/L vs27446367±2052.64)μg/L]和IgG1[(2323.33±502.43)μg/L vs(1296.33±32.72)μg/L]水平差异均有统计学差异,血清内卵清蛋白特异性的IgE[(0.84±0.11)μg/L vs(0.46±0.10)μg/L]和IgG1[(0.86±0.07)μg/L vs(0.62±0.10)μg/L]亦具有统计学意义。【结论】融合蛋白LTβR-Fc可以通过阻断共刺激分子LIGHT,促使皮炎模型EASI降低,同时血清总的与卵清蛋白特异性的IgE、IgG1显著下调,提示LIGHT-HVEM信号通路可作为特应性皮炎的潜在治疗靶点。
【关键词】：特应性皮炎 卵清蛋白 LIGHT-HVEM信号通路
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R758.2;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 研究背景12-20
• 一 共刺激分子LIGHT及其配体HVEM12-15
• 二 LIGHT-HVEM信号通路与炎症性疾病15-16
• 参考文献16-20
• 第一部分 IL-4、IL-5 和IFN-Γ在皮炎小鼠模型中的表达20-26
• 一 材料和方法20-22
• 二 结果22-24
• 三 讨论24-25
• 参考文献25-26
• 第二部分 皮炎小鼠模型血清中总IGE、IGG1以及卵清蛋白特异性IGE、IGG1的表达水平26-33
• 一 材料和方法26-28
• 二 结果28-31
• 三 讨论31-32
• 参考文献32-33
• 结论33-34
• 综述34-57
• 参考文献44-57
• 硕士期间发表的论文57-58
• 本课题的受资助情况58-59
• 缩写词表59-60
• 致谢60-61

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本文编号：727231