人miR-152基因的慢病毒载体的构建及稳定株筛选

发布时间：2017-08-26 06:24

  本文关键词：人miR-152基因的慢病毒载体的构建及稳定株筛选

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【摘要】：目的构建人miR-152基因重组慢病毒载体并筛选稳定表达株。方法 PCR扩增包括miR-152前体所在区域的基因组DNA,克隆到慢病毒载体表达质粒pGIPZ中,得到重组的pGIPZ-miR-152表达载体,通过与包装质粒共转染HEK-293T细胞,获得携带miR-152 minigene的重组慢病毒。用病毒感染HepG2细胞,72 h后用嘌呤霉素筛选。用real-time PCR法检测miR-152基因的表达。结果构建的重组质粒经双酶切验证和测序比对鉴定正确;该质粒转染293T细胞获取的慢病毒滴度达7.5×107TU/mL;用病毒感染HepG2细胞,感染效率达70%以上。药物筛选10 d后,获得的过表达株miR-152表达量比正常细胞高近10倍。结论成功构建人miR-152基因慢病毒载体质粒pGIPZ-miR-152,并筛选出miR-152过表达细胞株,为后续实验奠定基础。
【作者单位】： 浙江大学附属儿童医院内分泌科;南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健科;
【关键词】： miR- 慢病毒载体 HepG细胞
【基金】：国家自然科学基金项目(81270938) 创新研究群体科学基金
【分类号】：R346
【正文快照】： microRNAs(miRNA)是真核生物体内一类大小约22 nt的非编码RNA,其成熟体通过与mRNA的3'UTR(非编码区)互补配对结合,参与基因表达的转录后调控过程,进而调节人类几乎所有的生命活动过程和疾病的发生、发展。近年来,伴随着肥胖而发生的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发病率逐年提高[1

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