携带标记基因的慢病毒载体转染人脐带华通胶间充质干细胞的实验研究

发布时间：2017-08-28 16:59

  本文关键词：携带标记基因的慢病毒载体转染人脐带华通胶间充质干细胞的实验研究

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【摘要】：目的探讨含有增强型绿色荧光蛋白标记基因的慢病毒(Lentivirus-EGFP)体外转染人脐带华通胶间充质干细胞(HUWMSCs)的最佳方案及其对细胞增殖活性的影响。方法设计A、B、C、D共4种转染方案,分别以1、10、100的感染复数(MOI)转染体外培养的HUWMSCs,荧光显微镜及流式细胞仪检测各组荧光表达强度及转染效率,MTT法检测细胞增殖倍数。结果转染4 d后所有实验组转染率在10.6%~87.3%,并与MOI值存在量效关系,聚凝胺(5 mg/L)可显著增加病毒转染效率(P0.05)。MTT实验结果显示,与对照组比较,不同转染方案细胞增殖存在显著差异(P0.001)。A方案MOI=10组及B方案MOI=10组细胞增殖情况较其他组好。结论B方案MOI=10实验组为最佳转染方案。Lentivirus-EGFP能高效转染HUWMSCs且在2周内稳定表达转染基因,是一种安全、有效的基因转移载体。
【作者单位】： 第二军医大学海军临床医学院;中国人民解放军海军总医院心脏中心;
【关键词】： 间质干细胞 流式细胞术 慢病毒属 遗传载体 基因疗法 转染 细胞增殖
【基金】：国家自然科学基金面上项目(项目编号:81170094)
【分类号】：R341
【正文快照】： 干细胞工程研究通常需要在体外对干细胞进行基因修饰与改造,目前用于哺乳动物细胞基因修饰的工具主要包括质粒载体、腺病毒载体、反转录病毒载体和慢病毒(Lentivirus)载体等。其中,慢病毒载体是以人类免疫缺陷型病毒(HIV)为基础发展起来的基因修饰载体,它对分裂细胞和非分裂

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：748574