MicroRNA-34a调控细胞衰老的研究

发布时间：2017-08-29 12:15

  本文关键词：MicroRNA-34a调控细胞衰老的研究

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【摘要】：目的探讨微RNA-34a(miRNA-34a)对细胞通过调控沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)的表达,从而引起细胞衰老的作用。方法构建pre-miRNA-34a表达载体,并将其和一个不针对任何基因的微小RNA-1792(miRNA-1792)表达载体(其他实验室赠送)分别转染至HEK293和HUVEC细胞内,用RT-PCR、Western blot检测各细胞组SIRT1mRNA与蛋白表达水平,以未转染的细胞为对照;将HUVEC细胞分为转染不同质粒、未转染质粒和用SIRT1激活剂白藜芦醇(终浓度1μmol/L,作用2h)处理HUVEC细胞(HUVEC-Res)组,中性彗星电泳分析H2O2作用2h后4组HUVEC细胞的双链损伤情况;用阿霉素处理上述4组HUVEC细胞2h,β-半乳糖甘酶(SA-β-gal)染色检测各细胞不同时间点的衰老情况。结果测序结果表明pre-miRNA-34a表达载体构建成功;RT-PCR、Western blot显示HEK293-pre-miRNA-34a和HUVEC-pre-miRNA-34a中SIRT1mRNA和蛋白质表达的水平明显下降(P0.001);中性彗星电泳检测发现经H2O2处理后,HUVEC-Res组DNA损伤最轻,而HUVEC-miRNA-34a组DNA损伤程度最为严重;SA-β-gal染色显示DNA损伤后HUVEC-miRNA-34a衰老程度较其它3组严重,而HUVEC-Res组的衰老程度最为轻微。结论 miRNA-34a通过抑制SIRT1表达调控细胞衰老。
【作者单位】： 四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室;
【关键词】： miRNA-a SIRT 细胞衰老 DNA损伤
【基金】：教育部博士点基金新教师项目(No.20070610124) 教育部留学回国人员启动基金项目(No.2008890-19-11)资助
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 微RNA(microRNA,miRNA)是近几年继小分子干扰(siRNA)之后非编码RNA研究的又一热点。miRNA是一类长度约为20～25nt的单链小分子RNA(少数小于20nt),通过与靶mRNA的特异性结合,在转录后水平上对基因表达进行调控。越来越多研究表明miRNA参与细胞衰老进程[1,2]。miRNA微阵列结果

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1 高学军,蔡霞,张鹏,唐胜建,杨彪炳,牟少春,鞠晓燕;成纤维细胞体外培养过程中β-半乳糖苷酶的变化[J];潍坊医学院学报;2004年02期

2 贺福初;;衰老分子生物学巡礼——1989年洛杉矶讨论会概要[J];医学分子生物学杂志;1990年01期

3 陈方;武栋成;;细胞衰老机制的新进展[J];国外医学.老年医学分册;1997年01期

4 黄丹;细胞衰老的研究进展(综述)[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2001年06期

5 李文瑞;刘新光;周中军;;DNA损伤与细胞衰老关系的研究进展[J];国际检验医学杂志;2010年06期

6 万建，

本文编号：753221