融合蛋白IVT表达纯化及生物学活性检测

发布时间：2017-08-29 18:32

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【摘要】：目的克隆、表达和纯化融合蛋白IVT,并检测其生物学活性。方法采用基因工程手段将具有免疫功能、抗血管生成功能和诱导肿瘤细胞凋亡功能的3个基因片段进行融合构建了融合基因IVT。将其插入pPIC9表达质粒中,转化至毕赤酵母GS115(his4),筛选出的表达株经甲醇诱导,表达了重组融合蛋白IVT,并得以纯化。采用MTT法观察IVT对CTLL-2细胞、HUVEC和NCI-H446细胞增殖的影响;通过Transwell实验观察IVT对HUVEC迁移的影响;采用Hoechst染色检测IVT对NCIH446细胞凋亡的影响。结果 IVT能促进CTLL-2细胞增殖、抑制HUVEC和NCI-H446细胞生长、降低HUVEC细胞迁移能力以及诱导NCI-H446细胞凋亡。结论 IVT具有多种生物学活性,为开发多功能的新型融合蛋白打下了基础。
【作者单位】： 华侨大学生物医学学院;华侨大学分子药物教育部工程研究中心;
【关键词】： 免疫 抗血管生成 凋亡 融合蛋白IVT 增殖
【基金】：福建省自然科学基金资助项目(2010J01207) 中央高校基本科研业务费资助项目(JB-ZR1142)
【分类号】：R341
【正文快照】： 白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)由Morgan等[1]在1976年发现,是一种由激活的T淋巴细胞产生的细胞因子,其主要生物学效应是增强T细胞介导的免疫应答和NK细胞的免疫应答,如抗肿瘤作用[1-4]。近年来研究结果显示,IL-2 N端30个氨基酸残基[IL-2(1-30)]构成的螺旋A可以代替IL-2的

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