聚乙二醇修饰重组溶葡球菌酶的初步研究

发布时间：2017-08-31 13:27

  本文关键词：聚乙二醇修饰重组溶葡球菌酶的初步研究

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【摘要】：目的:探讨聚乙二醇(PEG)修饰重组溶葡球菌酶(lysostaphin)的反应条件以及修饰后产物的纯化方法。方法:采用超声波细胞粉碎机进行菌体破碎,阳离子交换层析、疏水层析进行蛋白纯化;在不同条件下,将活化的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酯(mPEG-SPA)与纯化后的lysostaphin反应,以单个PEG-Lysostaphin的比例为指标,用SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS方法确定其在修饰产物中的所占比例;采用Sephacryl S-200分子筛凝胶层析法对修饰产物进行分离纯化。结果:mPEG-SPA修饰lysostaphin的反应条件为pH 8.0,温度4℃,lysostaphin与mPEG-SPA的质量比为1∶5,反应时间2.0h;反应产物经一步Sephacryl S-200分子筛凝胶层析纯化后,初步实现分离。结论:初步确定了聚乙二醇修饰lysostaphin的反应条件及修饰产物的纯化方法。
【作者单位】： 浙江中医药大学生物工程学院;杭州北斗生物技术有限公司;
【关键词】： 聚乙二醇 重组溶葡球菌酶 纯化 单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺丙酸酯
【分类号】：R378
【正文快照】： 溶葡球菌酶(lysostaphin)由Schindler等[1]于1964年首次从一株编号为NRRL B-2628的模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans)培养物中发现并分离。此酶为246个氨基酸组成的单链分子,分子量27kDa,等电点PI介于10.4～11.4之间,其中锌为必须的辅助因子[2-4]。它能特异性水解细菌细

【参考文献】

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1 吴宏;房伟;袁t，

本文编号：765854