CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表达质粒的构建和表达

发布时间：2017-09-01 20:29

  本文关键词：CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表达质粒的构建和表达

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【摘要】：目的:构建结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,M.tb)CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表达质粒,并且在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法:以M.tb H37Rv株DNA作为模板,PCR法扩增ESAT6和PPE68基因,利用基因拼接技术中的Gene-SOEing法扩增ESAT6-PPE68融合基因,克隆至原核表达质粒pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a(+)-ESAT6-PPE68。再分别以H37Rv株DNA和重组质粒pET-32a(+)-ESAT6-PPE68为模板扩增CFP10和ESAT6-PPE68基因,Gene-SOEing法获取目的基因CFP10-ESAT6-PPE68,克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pET-32a(+)-CFP10-ESAT6-PPE68,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。结果:CFP10-ESAT6-PPE68酶切片段大小与理论值符合,基因测序结果显示融合基因CFP10-ESAT6-PPE68的序列与Genbank中序列一致,并在大肠杆菌中成功诱导表达了目的蛋白,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,相对分子量约为77 kD。结论:成功构建了M.tb CFP10-ESAT6-PPE68融合基因的原核表达质粒,并诱导表达出了融合蛋白,为该融合蛋白在结核病血清诊断学中的应用奠定了实验基础。
【作者单位】： 重庆医科大学病原生物学教研室、重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心;
【关键词】： 结核分枝杆菌 培养滤液蛋白 kD早期分泌抗原靶 戊糖--磷酸-差向异构酶 融合蛋白
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:30901280) 重庆市自然科学基金资助项目(编号:cstc2012jjA10023)
【分类号】：R378
【正文快照】： 结核病(tuberculosis,TB)位居单一病原引起病人死亡的严重传染病之首,是世界范围内第2大传染病,最新统计结果显示全世界结核分枝杆菌(my-cobacterium tuberculosis,M.tb)感染者约占人口总数的1/3[1]。随着M.tb耐药菌株的流行与传播、艾滋病的蔓延、卡介苗(bacillus calmette-g

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