cnksr2基因干扰腺病毒的构建及鉴定

发布时间：2017-09-02 16:21

  本文关键词：cnksr2基因干扰腺病毒的构建及鉴定

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【摘要】：构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒质粒载体并加以鉴定.根据小鼠cnksr2基因序列设计cnksr2干扰序列引物,定向克隆至穿梭载体pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位点,PmeⅠ酶切线性化的pShuttle-H1-Sicnksr2干扰质粒,并与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共同转化E.coli BJ5183感受态细菌,产生重组腺病毒载体.用PacⅠ酶切线性化的回收质粒,转染293A细胞,包装腺病毒颗粒,在倒置显微镜下观察细胞病理性变化(Cell pathological effect,CPE),用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并初步观察病毒感染PC12细胞对目的基因的干扰效率.经酶切鉴定、测序证实成功构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为3.98×107PFU/mL.cnksr2在大鼠及小鼠中具有保守性,该病毒能在大鼠来源的PC12细胞中成功表达,并且对cnksr2基因干扰效率达50%以上.结论:成功构建了小鼠cnksr2基因的干扰腺病毒载体.
【作者单位】： 南京大学医学院 江苏省医学分子技术重点实验室;南京师范大学生命科学学院 江苏省分子医学生物技术重点实验室;
【关键词】： cnksr基因 干扰 腺病毒
【基金】：国家自然科学基金(31171306) 江苏省自然科学基金(BK2011568)
【分类号】：R373
【正文快照】： CNKSR2(Connector enhancer of kinase suppressor of ras 2)是一个具有多个结构域的接头蛋白,由cnk-sr2基因编码.Therrien等人首先在果蝇中发现,cnksr编码一个新的参与Ras信号通路调节的蛋白CNK[1].随后,Nagase等人证实哺乳动物cnksr同源序列之一cnksr2在人脑组织中特异性高

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 何金生,王健伟,洪涛;腺病毒载体构建原理与方法的研究进展[J];中华实验和临床病毒学杂志;2001年04期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 何金生,王健伟,温乐英,徐倏焱木,屈建国,姜慧英,洪涛;用重组腺病毒表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7可获得良好的免疫学效果[J];病毒学报;2001年02期

2 鞠会艳,李彦舫,夏咸柱,高玉伟,杨松涛;表达犬瘟热病毒核蛋白的重组犬2型腺病毒构建与包装[J];吉林农业大学学报;2005年05期

3 来珊珊;陈卫波;徐康;丁尧;沈宁;潘飞燕;李朝军;薛斌;;重组GGPPS腺病毒载体的构建及其调节肝星状细胞活化的研究[J];南京师大学报(自然科学版);2011年04期

4 刘娣;许晓群;张建华;陈雪梅;苏庆红;孟德萍;王郡甫;;含hIL-24重组腺病毒载体(Ad-mda-7/hIL-24)的构建及其对喉癌细胞Hep2增殖的影响[J];中国生化药物杂志;2012年02期

5 冯学泉;徐军;王金环;徐新女;王淑杰;;LR重组法构建重组腺病毒rAd5-Vpr[J];天津医药;2008年11期

6 周立华;薛斌;郭仕英;史一欢;温传俊;李朝军;;人NRAGE基因重组腺病毒载体的构建及其对293细胞细胞周期的影响[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年01期

7 何金生,王健伟,温乐英,洪涛;一种快速构建重组腺病毒的简便方法[J];安徽医科大学学报;2002年01期

8 何金生,王健伟,姜秀丽,王大燕,温乐英,董京芳,屈建国,洪涛;复制缺陷型重组腺病毒rvAdG1VP7免疫学效果的研究[J];安徽医科大学学报;2002年02期

9 张梅,何金生,朱梅,汪红俊;重组腺病毒方法的改建[J];中国公共卫生;2005年01期

10 邓刚;黄飞舟;刘浔阳;罗成群;郭立武;;重组Akt腺病毒的构建及其在肝硬化大鼠肝脏中的表达[J];中国普通外科杂志;2008年07期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 鞠会艳;夏咸柱;高玉伟;杨松涛;李彦舫;;犬瘟热病毒核蛋白基因重组载体的构建与鉴定[A];第十一次全国养犬学术研讨会论文集[C];2005年

中国博士学位论文全文数据库 前6条

1 金吴东;mIκBα基因转染肝癌细胞（Hep G2）的辐射增敏作用[D];第一军医大学;2004年

2 黎军;AT2R基因转染对经球囊损伤的大鼠颈动脉体外培养后新生内膜增生影响的实验研究[D];第三军医大学;2005年

3 陈滨;腺病毒介导VEGF_（165）基因和eGFP基因共转染hBMSc对其体外增殖分化影响的实验研究[D];第一军医大学;2006年

4 陈晓波;负载供体凋亡脾细胞的受体耐受性树突状细胞延长协调性异种胰岛移植物存活时间的实验研究[D];上海交通大学;2007年

5 吴淑云;腺病毒介导重组人生长激素基因在兔和羊乳腺中高效表达的研究[D];西北农林科技大学;2009年

6 郭景茹;腺病毒介导的HSP70对冷应激大鼠CKs、应激激素及相应受体的影响[D];吉林大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张丽;腺病毒载体介导的发夹状RNA抑制三氧化二砷耐药的K562/AS2细胞MRP1基因表达的实验研究[D];广州医学院;2010年

2 周斌;鸡胚致死孤儿病毒的分离鉴定及其Ⅲa蛋白的原核表达与抗原性分析[D];南京农业大学;2003年

3 王维锋;腺病毒介导的siRNA抑制hTERT增强肝癌化疗敏感性的实验研究[D];第二军医大学;2004年

4 李伟;鼠重组IL-12腺病毒经脂质体包埋转染Kupffer细胞的实验研究[D];苏州大学;2006年

5 袁媛;人呼吸道合胞病毒F蛋白非复制型重组腺病毒的构建与鉴定[D];安徽医科大学;2006年

6 张睿;HSG不同结构域肽段的重组表达、纯化及功能研究[D];河北医科大学;2007年

7 何腾飞;腺病毒载体介导siRNA干扰VEGF-C表达抑制结肠癌淋巴管生成的实验研究[D];苏州大学;2008年

8 李伟;大鼠CRX基因的重组慢病毒载体LV-Rho-EGFP/CRX的构建和表达[D];中南大学;2008年

9 陈建明;rAd5-BMP2和rAd5-TGFβ3载体转染诱导滇南小耳猪BMSCs向软骨分化的实验研究[D];昆明医学院;2010年

10 赵奎;DRAM基因对胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响[D];苏州大学;2010年

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3 范明齐;冯嘉瑜;黄赤兵;王平贤;张艮甫;;人ICOS胞外区腺病毒载体的构建与鉴定[J];重庆医学;2006年16期

4 朱雄鹏;陈志哲;林旭;胡建达;李纯团;杨婷;许贞书;吕璐璐;陈彩平;张浪辉;;存活蛋白重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达[J];中国实验血液学杂志;2006年04期

5 张辛;杨民;林霖;陈苹;马康涛;敖英芳;周春燕;;核心结合因子(Cbfa1/Runx2)重组腺病毒载体的构建、鉴定及在脂肪来源干细胞中的表达[J];中国运动医学杂志;2008年01期

6 邱红;朱月蓉;邢继成;江淑芳;苏长青;曹祥荣;方琳;;携带人白细胞介素10和肝细胞生长因子双基因的重组腺病毒载体构建与鉴定[J];江苏大学学报(医学版);2010年01期

7 丁幸坡;金先庆;罗小辑;邱林;刘伟;;含hIGF-1基因腺病毒的构建及在兔骨髓间充质干细胞的表达[J];第三军医大学学报;2006年14期

8 陈健;李大江;王曙光;;凋亡素基因重组腺病毒的构建[J];消化外科;2006年04期

9 夏万尧;刘伟;王丹茹;丁文龙;钟梅芳;刘德莉;周广东;崔磊;曹谊林;;携带人TGF-β_1腺病毒载体的构建及鉴定[J];上海交通大学学报(医学版);2006年10期

10 仲飞;仲振宇;梁爽;李秀锦;;腺病毒载体介导gfp基因在树突细胞的转导及其影响因素的分析[J];中国免疫学杂志;2006年11期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 马立新;马琪;徐松;;新型、简捷、有效的方法构建基于腺病毒载体系统的cDNA表达文库[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年

2 孙聪;洪敏;韩业超;王少华;邓志会;刘佳;;STAT3靶向RNAi腺病毒表达载体的构建与鉴定[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年

3 凌静;李梅;马翔;薛凯;刁飞扬;崔毓桂;刘嘉茵;;小鼠Hsp10基因腺病毒载体的构建及在卵泡中的表达[A];江苏省遗传学会第七届二次代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年

4 赵亮;范里;刘旭平;朱明龙;谭文松;;293细胞的结团培养[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集（上）[C];2006年

5 刘旭平;徐佳t，

本文编号：779607