致病性耶尔森菌外膜蛋白A同源性分析及免疫学特征研究

发布时间：2017-09-03 06:16

  本文关键词：致病性耶尔森菌外膜蛋白A同源性分析及免疫学特征研究

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【摘要】：耶尔森菌属属于肠杆菌科,目前该菌属已发现17个种,其中对人和啮齿动物具有致病性的有三种：鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌。鼠疫耶尔森菌可导致烈性传染病鼠疫的发生。小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌除了可以引起腹泻以外,还可以引起一些严重的后遗症,如结节性红斑、反应性关节炎、心内膜炎等,有时候甚至可导致败血症而死亡。为预防和控制致病性耶尔森菌的感染,研发安全有效的鼠疫耶尔森菌的疫苗,寻找合适的抗原作为候选疫苗亚单位是势在必行。外膜蛋白A是一类普遍存在于肠杆菌科细菌中的具有一定免疫原性的种内保守蛋白。有研究表明,OmpA是致病性小肠结肠炎耶尔森菌一个主要的免疫原性蛋白,且不同生物血清型致病性小肠结肠炎耶尔森菌之间OmpA基因高度一致；鼠疫耶尔森菌的OmpA具有免疫保护性还能够提高其在细胞内的存活和对小鼠的毒力,故本研究主要探讨致病性耶尔森菌ompA的同源性、OmpA的交叉免疫原性以及小肠结肠炎耶尔森菌ompA基因缺失的毒力改变。本研究通过纳入615株致病性耶尔森菌,包括致病性小肠结肠炎耶尔森菌219株,鼠疫耶尔森菌262株,与假结核耶尔森菌134株,对纳入菌株进行ompA基因测序分析来分析种内及种间的同源性；表达并纯化了三种具有代表性的OmpA,进行Western blot免疫杂交以验证其交叉免疫原性；通过对比一株非致病性耶尔森菌、一株致病性耶尔森菌以及该致病性耶尔森菌的ompA缺失株的脾计数来观察并对比其毒力情况。结果显示,261株鼠疫耶尔森菌ompA基因序列的完全相同,132株假结核耶尔森菌ompA序列一致性98.8%,219株致病性小肠结肠炎耶尔森菌一致性97.7%；三个种的主要ompA基因序列型一致性达86.2%,在氨基酸水平的一致性达88.8%。通过免疫学分析也证实了三种致病性耶尔森菌的ompA不仅各自具有较好的免疫原性,同时还具有种间的交叉免疫原性。通过致病性耶尔森菌ompA基因缺失株毒力实验发现,ompA基因缺失后脾内清除效率低于野生株,证实了ompA基因与致病性小肠结肠炎耶尔森菌毒力有关。本研究首次证实了三种致病的耶尔森菌,即鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌和致病性小肠结肠炎耶尔森菌的OmpA蛋白不仅在基因水平具有高度一致性,且在蛋白质一级结构具有更高的一致性。本研究确认了OmpA是除了V抗原外三种致病性耶尔森菌的又一个共同的免疫原性抗原,可成为鼠疫乃至整个致病性耶尔森菌的疫苗的一个优秀的候选者。本研究还推断ompA基因与与致病性小肠结肠炎耶尔森菌毒力有关。
【关键词】：致病性耶尔森菌 外膜蛋白A 同源性 交叉免疫原性 毒力
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 缩略词5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 引言10-16
• 1. 致病性耶尔森菌概述10-12
• 2. 鼠疫耶尔森菌疫苗发展历史12-14
• 3. 外膜蛋白A研究进展14-15
• 4. 研究基础及意义15-16
• 第一部分 致病性耶尔森菌外膜蛋白A同源性分析16-30
• 1. 材料与方法16-22
• 2. 结果22-28
• 3. 讨论28-30
• 第二部分 致病性耶尔森菌外膜蛋白A免疫原性研究30-53
• 1. 材料与方法30-45
• 2. 结果45-51
• 3. 讨论51-53
• 第三部分 致病性小肠结肠炎耶尔森菌外膜蛋白A缺失株毒力研究53-58
• 1. 材料与方法53-54
• 2. 结果54-57
• 3. 讨论57-58
• 结论58-59
• 参考文献59-64
• 综述64-72
• 参考文献68-72
• 硕士在读期间发表文章72-74
• 致谢74

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本文编号：783332