刚地弓形虫RH株ROP11基因的克隆与真核表达载体的构建

发布时间：2017-09-04 16:23

  本文关键词：刚地弓形虫RH株ROP11基因的克隆与真核表达载体的构建

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【摘要】：目的构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白11(ROP11)的真核表达重组质粒并在真核细胞中表达目的蛋白。方法设计合成弓形虫ROP11基因引物,运用RT-PCR方法扩增ROP11基因并克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1-ROP11。将重组质粒转染HeLa细胞,采用间接免疫荧光法检测目的蛋白表达。结果 RT-PCR扩增弓形虫ROP11基因片段为1 548bp,与预期大小相符。构建的重组质粒pcDNA3.1-ROP11经PCR及EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定正确。重组质粒测序后与GenBank报道的ROP11基因比对,核苷酸序列同源性和推导氨基酸序列同源性均为99%。免疫荧光检测显示,在重组质粒转染的HeLa细胞胞浆观察到黄绿色荧光,对照组无荧光。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-ROP11,该重组质粒能够在真核细胞中表达目的蛋白,为弓形虫核酸疫苗的研制奠定了基础。
【作者单位】： 河北北方学院病原生物与免疫学研究所;
【关键词】： 刚地弓形虫 ROP 真核表达质粒
【基金】：河北省高等学校科学技术研究重点项目(No.ZH2012010)
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生原虫,能感染世界上所有的恒温哺乳动物和鸟类[1]。当中间宿主,如鸟类,啮齿类动物,反刍动物和人食入卵囊或生的、未熟的含有组织包囊的肉类时可引起感染。饮用含有刚地弓形虫的水是引起急性弓形虫病最主要的原因[2,3]。人感

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本文编号：792579