HGF及G-CSF诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞

发布时间：2017-09-05 09:08

  本文关键词：HGF及G-CSF诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞

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【摘要】：背景与目的：目前慢性肝病的患者众多，若未加干预，很多慢性肝病会发展为终末期肝病，一旦发展为终末期肝病，常规的治疗效果不理想，唯一疗效确切的是原位肝移植（Orthotopic livertransplantation,OLT），术后生存率一年为85%~90%，三年生存率75%~80%，但原位肝移植存在肝源不足，而且费用昂贵，以及移植后的免疫排斥反应等因素制约了它的发展，寻找一种新的方法治疗终末期肝病显得特别的重要。关于骨髓间充质干细胞（Bone marrowmesenchymal stem cells，BM-MSCs）方面的研究成为了近年来干细胞研究的热点，在一定的条件下BM-MSCs可以向骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞、肝细胞、神经元细胞等分化。BM-MSCs存在于骨髓中，取材方便，容易培养，生长旺盛，免疫原性低，不存在伦理问题，是理想的干细胞移植的种子细胞。另外，国内外大量的文献报道肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor，HGF）被广泛用于肝相关干细胞体外诱导分化的实验研究，可调控BM-MSCs分化为肝细胞。粒细胞集落刺激因子（granlocyte-colony stimulating factor，G-CSF)是一个大小为20-Ku的糖蛋白，有文献报道G-CSF体外培养BM-MSCs通过ILISA检测到HGF水平，还有报道培养液中加入了G-CSF能提高BM-MSCs活性。本实验的目的是探讨HGF以及G-CSF可否诱导大鼠BM-MSCs分化为肝样细胞，为干细胞的研究提供更有效的诱导方案。 方法：以贴壁法分离、培养大鼠BM-MSCs,流式细胞术鉴定表面标志。实验分为：对照组（10%FBS)，0.1μmG-CSF干预组,20ng/mLHGF干预组，HGF联合G-CSF共同干预组(0.1μmG-CSF+20ng/mLHGF)，诱导后第7天、14天和21天提取细胞总RNA以及总蛋白后进行RT-PCR和Western blot检测白蛋白（ALB）和甲胎蛋白（AFP）基因mRNA转录和蛋白水平。 结果：20ng/mLHGF干预组和HGF联合G-CSF共同干预组P3代BM-MSCs诱导后细胞形态似肝样细胞。BM-MSCs表面标志物：CD34-PE0.3%,CD45-FITC0.1%,CD90-FITC99.6%,CD105-PE99.8%。20ng/mLHGF干预组和HGF联合G-CSF共同干预组检测到白蛋白（ALB）和甲胎蛋白（AFP）基因mRNA转录水平及蛋白水平表达。在第7天、14天、21天，随时间增加ALB表达量递增、而AFP表达量递减，，且同一时间两组表达量均有差异（P0.05）。 结论：（1）HGF能诱导大鼠BM-MSCs分化为肝样细胞。（2）G-CSF对HGF诱导大鼠BM-MSCs分化为肝样细胞有协同作用。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 肝细胞生长因子 粒细胞集落刺激因子 肝样细胞
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.3
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 第一章 大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和流式细胞鉴定13-18
• 1 材料13-14
• 2 方法14-15
• 3 结果15-16
• 4 讨论16-18
• 第二章 大鼠BM-MSCs体外分组及诱导18-20
• 1 材料18
• 2 方法18-19
• 3 结果19
• 4 讨论19-20
• 第三章 大鼠BM-MSCs向肝样细胞分化20-32
• 1 材料20-21
• 2 方法21-25
• 3 结果25-30
• 4 讨论30-32
• 全文结论32-33
• 参考文献33-35
• 附图35-36
• 文献综述36-45
• 参考文献42-45
• 致谢45-46
• 攻读学位期间发表的学术论文46-47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：797079