家蝇Defensin基因原核表达条件的优化及其抑菌活性

发布时间：2017-09-05 12:14

  本文关键词：家蝇Defensin基因原核表达条件的优化及其抑菌活性

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【摘要】：目的优化家蝇Defensin基因原核表达条件,并初步研究其抑菌活性。方法 Defensin基因成熟肽被克隆入pGEX-4T-1原核表达载体中,构建重组质粒pGEX-4T-1/Defensin,并转化宿主菌后诱导表达,表达过程中对菌液起始浓度、IPTG浓度、诱导温度和时间进行优化。采用亲和层析法分离纯化融合蛋白,SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达情况和分子量。用凝血酶切除谷胱甘肽标签,并通过体外抑菌实验检测其抗菌活性。结果成功构建重组质粒pGEX-4T-1/Defensin,目的基因能够在大肠埃希菌内高效表达,分子量为4 kD,与预期值一致,表达量约达40%。抑菌实验显示其对大肠埃希菌K12D31生长有一定的抑制作用。结论本实验为家蝇Defensin基因功能的深入研究奠定了工作基础。
【作者单位】： 广东医学院寄生虫学暨临床寄生虫检验学教研室;广东省生物活性药物研究重点实验室;
【关键词】： 抗菌肽 表达 活性 Defensin
【分类号】：R384
【正文快照】： 昆虫防御素(Defensin)是一类碱性小分子多肽,具有热稳定性强、诱导源的非专一性和抗菌谱广等特点,有望开发成一类新型的多肽抗生素[1-2]。由于其在组织中含量低,分离获得大量的天然产物很困难,而人工合成多肽的成本高,限制了其应用前景。因此,利用基因重组技术克隆表达基因是

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本文编号：797902