截短ALT1蛋白的获得及其多克隆抗体的制备

发布时间：2017-09-06 15:52

  本文关键词：截短ALT1蛋白的获得及其多克隆抗体的制备

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【摘要】：目的原核表达、纯化截短ALT1蛋白,制备ALT1多克隆抗体。方法利用pCold TF载体原核表达系统,IPTG诱导,表达经生物信息学分析含有两个编码ALT1抗原表位的ALT1 N端1～115个氨基酸序列的基因片段,依次经镍(Ni)离子亲和柱纯化、HRV 3C蛋白酶酶切、二次镍离子亲和柱纯化和分子筛柱层析得到不带标签的截短ALT1纯蛋白,用纯蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果经测序证实,成功构建了截短pCold TF-ALT1表达载体。获得纯度达90%的不带标签的截短ALT1重组蛋白,制备了效价达4.0×106的ALT1多克隆抗体,经Western blot鉴定,能特异性地识别ALT1抗原和肝细胞裂解液。结论成功获得高质量的截短ALT1无标签蛋白及其特异的多克隆抗体,为ALT1的免疫学检测试剂的研发提供了依据。
【作者单位】： 重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室;河南省人民医院核医学科;遵义医学院附属医院输血科;
【关键词】： ALT 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金(31270984)
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)是一种以磷酸吡哆醛为辅基的酶,其在体内可逆地催化L-丙氨酸和α-戊二酸转化为L-谷氨酸和L-丙酮酸,通过调节这4类物质的量而在糖与氨基酸的相互转化过程中发挥重要作用。由于ALT在肝脏中的含量较血清中高1 000倍以上,因此肝脏

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本文编号：804055