IFITM2的克隆表达及其抗病毒作用初探

发布时间：2017-09-06 22:24

  本文关键词：IFITM2的克隆表达及其抗病毒作用初探

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【摘要】：目的:构建含有ifitm2基因的重组质粒,在人胚肾HEK293T细胞中表达,并验证IFITM2蛋白的抗病毒作用。方法:参照Genbank ifitm2基因序列,设计上下游引物,通过RT-PCR技术扩增ifitm2基因,并将扩增产物连接至pMD18-T-sim-ple载体上,目的基因测序正确后进一步亚克隆至真核表达载体pVAX1上,转染HEK293T细胞,通过RT-PCR,蛋白免疫印迹(Western blot)和激光共聚集显微镜(LCSM)验证外源基因在细胞内的表达情况。同时HEK293T细胞过表达IFITM2蛋白,利用含有EGFP基因的VSV-G假膜病毒感染细胞,通过Western blot检测IFITM2蛋白对病毒的抑制作用。结果:成功获得ifitm2基因,测序正确,将其连接到pVAX1载体中,经酶切鉴定,证明含有ifitm2基因的重组质粒构建成功,Western blot和LCSM分析表明,目的基因能够在HEK293T细胞中表达,且呈广泛分布。过表达IFITM2蛋白后,荧光蛋白分析表明,该蛋白对病毒感染具有一定的抑制作用。结论:成功构建了含有ifitm2基因的重组真核表达质粒,该质粒可以在真核细胞中得到有效表达,且对VSV-G假膜病毒具有一定抑制作用,该研究为进一步探讨IFITM2蛋白的抗病毒作用及其分子机制提供了实验及理论基础。
【作者单位】： 吉林农业大学动物科技学院;军事医学科学院军事兽医研究所 省部共建人兽共患病预防与控制重点实验室;
【关键词】： IFITM 克隆表达 抗病毒作用
【基金】：973计划前期研究专项课题( No.2011CB512110) 中国博士后科学基金面上项目( No.20110491803、No.2012T50859)
【分类号】：R392
【正文快照】： 干扰素诱导的跨膜蛋白(Interferon inducedtransmembrane proteins,IFITMs)是在干扰素刺激后产生的一组蛋白,其家族成员包括4个序列高度相关的膜表面蛋白,即IFITM1、IFITM2、IFITM3和IF-ITM5,它们均在细胞生长的不同阶段发挥一定的生物学功能[1,2],Friedman等[3]在1984年首先

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 朱娜;李昌;郭焱;李沂;孙丹丹;任静强;杜寿文;秦艳青;王茂鹏;田宇飞;金宁一;;IFITM3基因的克隆及其在真核细胞中的表达与定位研究[J];中国免疫学杂志;2012年11期

【共引文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 李沂;IFITM1\2\3的克隆表达及其抗病毒作用研究[D];吉林农业大学;2013年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 杨雯;万孝玲;田春林;王卫群;刘晓泉;;弓形虫表面抗原SAG4基因的克隆、表达和鉴定[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2009年04期

2 林平;邹海峰;于靖;边淑玲;刘紫君;于晓光;;降钙素基因相关肽衍生物克隆表达与活性鉴定[J];中国老年学杂志;2008年18期

3 张烨;于在江;黄捷勤;唐启慧;陈禹保;辛丽;陈永坤;舒跃龙;;流感病毒H3N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达[J];生物技术通报;2011年01期

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5 李杰,徐淑兰,朱燕,王們,李芳才,侯金玲;退热宁的抗菌、抗病毒作用研究[J];山东医药工业;2000年04期

6 黄海;冯美卿;孙传文;徐树光;普俊学;周s，

本文编号：805787