弓形虫pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重组基因的构建、表达及其免疫保护作用

发布时间：2017-09-08 01:23

  本文关键词：弓形虫pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重组基因的构建、表达及其免疫保护作用

  更多相关文章： 弓形虫 SAG1 SAG4 pET28a 免疫保护性

【摘要】：目的构建弓形虫pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重组基因并原核细胞表达弓形虫pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重组蛋白；并以此免疫动物来评价pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重组蛋白的免疫效果。为弓形虫病的基因疫苗应用提供科学依据。方法根据GenBank发表的RH株弓形虫SAG1和SAG4序列设计合成2对特异性引物,提取弓形虫基因组DNA,以其为模板,PCR扩增这2个抗原基因,并构建到pMD19(Simple)克隆载体上,经菌落PCR、双酶切鉴定并测序正确后,再将酶切产物纯化好的SAG1和SAG4基因构建到pET28a原核表达系统中,并在BL21大肠埃希菌中表达；鉴定并纯化重组蛋白,免疫小鼠,取血清,应用间接ELISA法检测小鼠血清中抗弓形虫抗体IgG,并通过攻虫试验来观察小鼠的发病及死亡情况以评价这2个重组蛋白的免疫保护作用。结果成功获取SAG1与SAG4基因,并且将这2个基因构建到了pMD19 (Simple)载体和原核表达质粒pET28 a载体上,成功获得pET28a-SAG4和pET28a-SAG1。原核表达后分别获取到SAG4和SAG1目的重组蛋白。应用纯化的重组蛋白免疫小鼠后各组小鼠血清OD值差异有统计学意义(p0.01),双蛋白免疫组的血清OD值升的最高；攻击实验时,双蛋白免疫组存活时间最长,pET28a-SAG1组存活时间比p ET28a-SAG4组长,差异有统计学意义(p0.01)。结论1.成功构建pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重组基因并表达和纯化出目的重组蛋白。2.国内首次用昆明小鼠做弓形虫的攻虫实验,证明昆明小鼠对弓形虫易感。3.攻虫实验表明双蛋白免疫组小鼠存活时间长于单蛋白免疫的存活时间,pET28a-SAG1组小鼠存活时间长于pET28a-SAG4组。pET28a-SAG1蛋白的免疫保护作用比pET28a-SAG4蛋白好。4.这两个基因所表达的蛋白质皆有免疫保护作用。
【关键词】：弓形虫 SAG1 SAG4 pET28a 免疫保护性
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 个人简历3-6
• 英文缩略词汇表6-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 第一章 弓形虫pET28a-SAG1和pET28a-SAG4基因的构建及鉴定15-51
• 1. 实验材料15-20
• 2. 实验方法20-33
• 3. 实验结果33-47
• 4. 讨论47-51
• 第二章 弓形虫pET28a-SAG1和pET28a-SAG4蛋白的原核表达51-68
• 1. 实验材料51-54
• 2. 实验方法54-60
• 3. 实验结果60-66
• 4. 讨论66-68
• 第三章 弓形虫pET28a-SAG1和pET28a-SAG4所表达的蛋白疫苗的动物免疫保护性作用68-79
• 1. 实验材料68-69
• 2. 实验方法69-72
• 3. 实验结果72-77
• 4. 讨论77-79
• 结论79-80
• 参考文献80-83
• 附录83-92
• 综述92-101
• 参考文献96-101
• 致谢101-102
• 硕士期间发表的论文102

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王建成;什么是弓形虫和弓形虫病?[J];中华检验医学杂志;2003年05期

2 袁吉云,张奎,杨汝杰,张蔚;苏州地区弓形虫病的初步调查(摘要)[J];苏州医学院学报;1982年01期

3 张秀平;;弓形虫病化学治疗的研究[J];国外医学(寄生虫病分册);1984年03期

4 王长烈;在淋巴结炎患者中查出弓形虫病[J];国外医学(寄生虫病分册);1987年03期

5 孙德建;;布隆迪弓形虫病血清流行病学调查[J];国外医学(寄生虫病分册);1989年03期

6 邵其峰;赵玉强;;全国弓形虫病防治科研会议简讯[J];中国寄生虫病防治杂志;1990年04期

7 甘绍伯,李爽;弓形虫病100例分析[J];中国人兽共患病杂志;1991年05期

8 崔君兆,马重麟,陆宙光,于恩庶;诊治11例弓形虫病的经验和诊断标准的探讨[J];中国人兽共患病杂志;1991年05期

9 薛纯良;弓形虫病的现代治疗[J];寄生虫学与寄生虫病杂志;1991年02期

10 陈珊;眼弓形虫病14例临床分析[J];实用眼科杂志;1991年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 朱引洁;吴文学;贺国强;;弓形虫病的诊断现状[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年

2 李辉;张健;;一例犬弓形虫病的诊断与治疗[A];中国畜牧兽医学会小动物医学分会第四次学术研讨会、中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十六次学术研讨会论文集（2）[C];2009年

3 李祥瑞;;弓形虫病的流行的新趋势[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年

4 崔平;秦建华;方素芳;;河北省动物弓形虫病流行病学调查[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年

5 蔺智兵;张厚双;曹杰;周勇志;李国清;周金林;;弓形虫real-time PCR检测方法的建立和初步应用[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年

6 杨娜;穆名杨;李红魁;何建斌;;中国东北地区鸡源弓形虫的流行病学调查[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2012年

7 刘晶;蔡进忠;于晋海;夏兆飞;林德贵;刘群;;几种动物弓形虫病血清流行病学的初步调查[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年

8 王权;蒋蔚;荆振宇;陈永军;杨康;宋宁宁;崔常勇;;五种中药体外抗弓形虫抑制效果的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年

9 巩薇;卫礼;王吉;贺争鸣;邢瑞昌;;实验小鼠弓形虫检测方法的建立及应用[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年

10 陈西岐;刘秀兰;张克功;于德顺;;猫弓形虫病的诊治[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 林晓丽;养猫者易感染弓形虫应谨防患精神分裂症[N];中国中医药报;2007年

2 小郭;弓形虫病危害不轻[N];中国商报;2000年

3 戴培红;北京友谊医院探索治疗弓形虫病的新途径[N];中国医药报;2000年

4 本报记者 蔡玉冰 通讯员 黄贤君;弓形虫没你想的可怕[N];广东科技报;2012年

5 李水源;当前猪场弓形虫病的防控[N];中国畜牧兽医报;2013年

6 本报记者 白轶南;弓形虫病 危及胎儿健康[N];保健时报;2005年

7 临城县畜牧局 李路民;猪得弓形虫病 吃了猫的亏[N];河北科技报;2002年

8 北京友谊医院北京热带医学研究所研究员 甘绍伯 副主任医师 冯曼玲;弓形虫——宠物的“宠物”[N];健康报;2000年

9 连孝华;孕妇玩猫狗易危害胎儿[N];卫生与生活报;2007年

10 王志海 邵芹;犬弓形虫病[N];中国畜牧报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 吕刚;弓形虫表面抗原蛋白5的结构分析及免疫学研究[D];山东大学;2015年

2 龚国华;上海城区犬、猫弓形虫病流行病学调查及药物治疗的研究[D];南京农业大学;2010年

3 尹青;弓形虫Δbag1Δku80株的构建及其作为猫弓形虫病疫苗候选株的免疫原性、安全性和效力的评价[D];中国农业大学;2015年

4 徐鹏;弓形虫新毒力基因TgMAPK1表达特性及其初步功能研究[D];吉林农业大学;2015年

5 张步彩;泰州地区猪弓形虫血清流行病学调查及中药治疗急性感染弓形虫小鼠效果的研究[D];扬州大学;2015年

6 陈金铃;CD4~+CD25~+调节性T细胞失能参与弓形虫分泌排泄抗原致小鼠早孕流产的机制[D];南京医科大学;2013年

7 杨鸣发;弓形虫RH株脯氨酰氨氨基肽酶特征与功能性研究[D];东北农业大学;2016年

8 张括;人—兔嵌合型抗弓形虫IgM抗体基因库的构建和抗弓形虫IgG抗体参考物质的研究[D];北京协和医学院;2016年

9 张伟超;TALEN和CRISPR技术在弓形虫致病机制研究中的应用[D];华中农业大学;2016年

10 吴亮;弓形虫“迟发型死亡”机制的研究[D];江苏大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杨晓宇;重组弓形虫TRXL蛋白和EN02蛋白免疫保护力的评价[D];中国农业科学院;2015年

2 王卫艳;弓形虫SAG2、GRA6、GRA7基因的重组表达及应用研究[D];济南大学;2015年

3 王成双;弓形虫ROP46基因缺失虫株构建及其生物学特性分析[D];黑龙江八一农垦大学;2016年

4 赵禹;弓形虫棒状体颈部蛋白5和10基因的免疫保护作用及其基因缺失株的构建[D];甘肃农业大学;2016年

5 寇金华;猪弓形虫感染ELISA和胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立与初步应用[D];吉林大学;2016年

6 万俐娟;弓形虫毒力因子ROP18促进神经细胞凋亡的机制研究[D];安徽医科大学;2016年

7 古一;弓形虫CK1α缺失株感染小鼠毒力试验及机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2016年

8 张晓川;苦参生物碱类成分抗弓形虫作用的研究[D];延边大学;2016年

9 王贝贝;弓形虫pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重组基因的构建、表达及其免疫保护作用[D];广西医科大学;2016年

10 马磊;弓形虫蛋白激酶MAPK1在宿主炎症小体通路中的功能研究[D];吉林农业大学;2016年

，

本文编号：811050