HL-60细胞胞质体的制备

发布时间：2017-09-08 12:18

  本文关键词：HL-60细胞胞质体的制备

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【摘要】：建立悬浮培养细胞胞质体制备及鉴定方法,为细胞重构奠定基础。采用密度梯度离心法和低速离心法纯化人白血病HL-60细胞,在单独细胞松弛素B(CB)和联合秋水酰碱介导下,分别于34℃和25℃,50%Percoll等密度梯度离心对HL-60细胞进行脱核,然后分别用38%和40%Percoll密度梯度离心纯化胞质体;采用Wright-Giem-sa染色和4,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)/羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)荧光染料双染色观察胞质体形态学变化;采用流式细胞术(FCM)检测胞质体表型和线粒体膜电位(MMP)以评价其活性。结果显示,CB联合秋水酰碱介导HL-60细胞脱核率为91.98%±4.29%,明显高于单独CB组(74.95%±3.02%)(P0.01);34℃组的脱核率和直径≥5μm胞质体比例均明显高于25℃组(P0.01,P0.05);38%Percoll密度梯度离心纯化胞质体纯度高于40%Percoll组;纯化的HL-60胞质体表型无明显变化,12h内其活性达80%以上。结果表明,CB联合秋水酰碱介导下50%Percoll密度梯度离心脱核、38%Percoll密度梯度离心纯化、DAPI/CFSE双染鉴定、MMP检测是制备和鉴定悬浮培养细胞胞质体的适宜方案。
【作者单位】： 遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室;
【关键词】： 胞质体 脱核 HL-细胞 细胞松弛素B 秋水酰碱
【基金】：贵州省科技计划发展资助项目(黔科合计字2051号)
【分类号】：R329
【正文快照】： 引言胞质体(Cytoplast)即去核细胞是研究线粒体DNA、细胞质膜成分及功能、细胞凋亡、细胞分化等很好的生物模型,也是通过细胞核与细胞质替换实现细胞重构的必备要件。胞质体的制备方法分为侵入性脱核和非侵入性脱核两种[1],前者是采用显微操作机械去核,适用于体积较大的细胞;

【参考文献】

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本文编号：813973