抗猪PD-L1分子的单克隆抗体制备及免疫学特性分析

发布时间：2017-09-09 02:05

  本文关键词：抗猪PD-L1分子的单克隆抗体制备及免疫学特性分析

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【摘要】：为制备抗猪程序性死亡因子配体1(PD-L1)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其免疫学特性,本研究将猪PD-L1基因的外膜区利用原核表达载体pET32a进行表达,以纯化的表达蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以表达PD-L1-Fc蛋白的293T细胞作为抗原,采用间接免疫荧光试验筛选杂交瘤培养上清,获得两株稳定分泌抗猪PD-L1 MAb的杂交瘤细胞系。MAb亚型鉴定均为IgG1型,轻链为κ链。Western blot试验表明这两株MAb均可以特异性识别PD-L1蛋白。流式细胞检测结果显示这两株MAb可以识别表达于293T细胞膜表面的PD-L1分子,但不能阻断PD-L1分子与其受体PD-1的结合。这两株MAb的获得为研究PD-1/PD-L1通路与猪的某些感染性疾病发展进程的关系提供了必要的检测工具。
【作者单位】： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室;西北农林科技大学动物医学院;中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病研究室;
【关键词】： PPD-L分子 PD-/PD-L通路 单克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金(31001050、30901080)
【分类号】：R392
【正文快照】： 程序性死亡因子配体1(PD-L1)是B7分子家族的一个新成员,为I型跨膜糖蛋白,由信号肽、外膜区、跨膜区和胞内区4部分组成,表达于多种组织和细胞,其受体为CD28家族的程序性死亡因子1(PD-1分子)[1]。研究表明PD-1与PD-L1结合可以抑制T细胞和B细胞的激活,对免疫应答起负调控作用[1]

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 彭金美;李登云;田志军;安同庆;刘恒贵;周艳君;童光志;;猪PD-1分子及其配体的实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J];中国兽医科学;2010年04期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 代海丽;高铁磊;朱琳;曹威;栾颖;靳占峰;;柯萨奇病毒B3的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J];中国卫生检验杂志;2012年01期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 韦天超;田志军;周艳君;安同庆;肖燕;彭金美;姜一峰;童光志;;猪IFN-γ mRNA Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J];中国兽医科学;2009年02期

2 张贺楠;赖汉漳;齐岩;孔留五;张小桃;曹伟胜;廖明;;鸡IFN-α和IFN-β及IFN-γ基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J];中国兽医科学;2009年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张春艳,张志方,宁波,李树浓,朱兆玲;抗人CD154单克隆抗体的构建及免疫学特性分析[J];中国动脉硬化杂志;2001年05期

2 赖s，

本文编号：817651