大鼠血小板衍生生长因子C重组腺病毒载体的构建及在内皮祖细胞中的表达

发布时间：2017-09-11 01:29

  本文关键词：大鼠血小板衍生生长因子C重组腺病毒载体的构建及在内皮祖细胞中的表达

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【摘要】：目的构建含大鼠血小板衍生生长因子C(PDGF-C)基因的pAD-EGFP-PDGF-C的重组腺病毒表达载体,体外转染骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)并观察目的基因蛋白及mRNA表达情况。方法通过逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)法从pIRES2-EGFP-PDGF-C真核表达载体中获得PDGF-C目的片段,经BP重组与LR重组插入到pAD/CMV/V5-DEST,构建pAD-PDGF-C-IRES2-EGFP腺病毒载体。酶切及DNA测序鉴定后转染HEK293A包装、纯化,测定病毒滴度后转染大鼠骨髓源性EPCs,应用Real-time qPCR、蛋白免疫印迹法(Western blotting)等方法检测PDGF-C蛋白及mRNA的表达。结果核酸内切酶消化及PCR分析证实PDGF-C基因成功插入pAD/CMV/V5-DEST腺病毒载体,转染后荧光显微镜下观察可见绿色荧光蛋白表达,转染48h后实时定量酵素聚合反应技术(Real-time qPCR)测定EPCs中PDGF-C含量明显提高(P0.05),Wester blotting检测证实在46×103存在特异性条带。结论成功构建了大鼠PDGF-C基因的腺病毒表达载体pAD-EGFP-PDGF-C,体外转染大鼠骨髓源性EPCs能高效表达目的基因产物,为后续研究PDGF-C基因功能以及进一步开展基因治疗奠定了基础。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第二医院血管外科;
【关键词】： 血小板衍生生长因子C pAD/CMV/V-DEST腺病毒载体 内皮祖细胞 转染
【基金】：重庆市卫生局医学科研基金资助项目(2012-2-053)
【分类号】：R363
【正文快照】： 血小板衍生生长因子C(PDGF-C)是由Li等[1]新近发现的PDGF家族成员,活化形式为同二聚体PDGF-CC,受体为PDGFR-αα和PDGFR-αβ,分子结构中除包含高度保守的PDGF/VEGF同源结构域外,还含有独特的CUB结构域[2-3]。本研究旨在以复制缺陷型腺病毒pAD/CMV/V5-DEST为载体,采用Gateway

【参考文献】

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1 况春燕;黄岚;喻杨;邓梦杨;王逵;钱德慧;;提高培养内皮祖细胞成功率的探讨[J];重庆医学;2011年32期

【二级参考文献】

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1 张社红;项平;;大鼠骨髓内皮祖细胞的分离培养及其生物学特性[J];蚌埠医学院学报;2008年05期

2 王杰;黄军华;汪浩文;刘俊峰;;大鼠骨髓内皮祖细胞的体外扩增培养[J];疑难病杂志;2010年06期

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1 唐猛;;内皮祖细胞与心血管缺血性疾病的研究进展[J];中国医药导报;2006年11期

2 陈剑飞;黄岚;晋军;武晓静;刘兰;崔斌;赵刚;;动脉粥样硬化鼠骨髓内皮祖细胞数量和功能的变化及其意义[J];第三军医大学学报;2006年10期

3 陈剑飞;黄岚;;年龄对内皮祖细胞修复损伤血管内膜的影响[J];心血管病学进展;2006年04期

4 陶蕊;王一尘;段俊丽;;内皮祖细胞对血管新生的影响及他汀的干预作用[J];国外医学(老年医学分册);2007年06期

5 宋晓燕;姜振宇;;内皮祖细胞在缺血性心脏病中的研究进展[J];长春中医药大学学报;2007年06期

6 卢旺盛;田增民;;内皮祖细胞与脑血管疾病[J];海军总医院学报;2008年01期

7 宋显晶;杨萍;刘斌;姜峰;;人脐静脉血内皮祖细胞的分离、培养及鉴定[J];中国实验诊断学;2008年04期

8 杨晓颖;谈世进;;血管内皮祖细胞与冠心病的研究进展[J];心血管病学进展;2008年04期

9 吴建祥;梁春;任雨笙;吴宗贵;;麝香保心丸对内皮祖细胞功能及分泌一氧化氮的影响[J];中国中西医结合杂志;2009年06期

10 韩娟萍;哈小琴;吕同德;张卫泽;尹强;;内皮祖细胞增殖、迁移和黏附能力与端粒酶活性的关系[J];第三军医大学学报;2009年20期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈鹏;朱初麟;程江涛;杜廷海;;中医药对内皮祖细胞的影响[A];第二届全国中西医结合心血管病中青年论坛暨第二届黄河心血管病防治论坛资料汇编[C];2011年

2 周音频;黄岚;宋耀明;武晓静;晋军;张坡;宋明宝;;粒细胞集落刺激因子动员骨髓促进损伤血管内皮修复[A];中国心脏大会（CHC）2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年

3 蔡绍皙;陈斯佳;于文娟;;针刺,作为物理刺激对内皮祖细胞的动员作用[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年

4 李巍;王航;秦浙学;刘洁;黄岚;;硫化氢对大鼠骨髓源内皮祖细胞数量及生理学特性影响[A];中国心脏大会（CHC）2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年

5 赵刚;宋明宝;于学军;朱光旭;于世勇;董红梅;康华利;黄岚;;肝细胞生长因子对低密度脂蛋白损伤内皮祖细胞功能的影响[A];中国心脏大会（CHC）2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年

6 张坡;黄岚;朱鲜阳;韩秀敏;;辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞迁移的不同影响[A];中国心脏大会（CHC）2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年

7 赵刚;宋明宝;于学军;朱光旭;于世勇;董红梅;康华利;黄岚;;肝细胞生长因子对低密度脂蛋白损伤内皮祖细胞功能的影响[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

8 李巍;王航;秦浙学;刘洁;黄岚;;硫化氢对大鼠骨髓源内皮祖细胞数量及生理学特性影响[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

9 张坡;黄岚;朱鲜阳;韩秀敏;;辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞迁移的不同影响[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

10 徐小勇;廉姜芳;葛世俊;周建庆;;大鼠骨髓内皮祖细胞的中电导钙离子激活钾通道与容积敏感性氯离子通道[A];2011年浙江省心电生理与起搏学术年会论文汇编[C];2011年

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1 广闻;骨髓干细胞治疗多种眼疾[N];医药经济报;2002年

2 通讯员 王其玲 记者 罗坚梅;干细胞，燃起人类绝处逢生新希望[N];杭州日报;2005年

3 姚春雨 钱勇;盖鲁粤：要啃心衰“硬骨头”[N];中国医药报;2003年

4 记者 冯卫东;科学家诱使骨髓释放额外成体干细胞[N];科技日报;2009年

5 高春锦;高压氧医学有待进一步挖掘[N];中国医药报;2008年

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