小鼠胚胎生殖细胞系的建立及其印记状态

发布时间：2017-09-15 02:36

  本文关键词：小鼠胚胎生殖细胞系的建立及其印记状态

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【摘要】：目的成功建立小鼠胚胎生殖细胞(EGCs)系,并初步分析小鼠胚胎生殖细胞的印记状态。方法建立交配后12.5d(12.5dpc)原始生殖细胞(PGCs)来源的小鼠EGCs,通过碱性磷酸酶(AKP)染色、免疫荧光细胞化学、体内分化及体外分化等方法检测EGCs的多能性,并以小鼠胚胎干细胞(ESCs)为对照,应用Real-time PCR检测EGCs中与发育相关的Ins2、Lgf2、H19、Lgf2r等11个父源与母源印记基因的表达情况。结果成功建立小鼠EG细胞系,EGCs克隆AKP染色显示有高水平的AKP活性,免疫荧光细胞化学方法显示克隆表达小鼠ESCs多能性标记物Oct4及细胞表面标记SSEA-1。核型分析检测显示,小鼠EGCs为正常的40条染色体,体内可分化出3个胚层来源的组织,说明小鼠EGCs具有多能性;Real-time PCR结果显示EGCs的印记基因表达量显著高于ESCs。结论12.5dpc PGC来源的EGCs的印记基因处于擦除状态。
【作者单位】： 哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室;牡丹江医学院组织学与胚胎学教研室;
【关键词】： 胚胎生殖细胞 印记基因 实时定量聚合酶链反应 小鼠
【基金】：黑龙江省青年专项基金资助项目(QC2011C056) 黑龙江省研究生创新科研基金资助项目(YJSCX2011-321HLJ)
【分类号】：R321
【正文快照】： 原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)是精子和卵细胞的前体细胞,研究证实PGCs的发育伴有细胞表观遗传的变化,包括DNA去甲基化和印记擦除。这个主动的去甲基化的过程,始于PGCs进入生殖嵴,交配后11.5d(11.5 days postcoitum,11.5dpc)印记基因和非印记基因都有一定的甲基化

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