甘草酸单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2017-09-17 15:47

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【摘要】：目的:制备特异性的甘草酸(GA)单克隆抗体。方法:用合成的甘草酸-牛血清白蛋白(GA-BSA)人工抗原免疫BALB/c小鼠;待血清检测阳性后,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按10∶1的比例融合;用间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;用阳性细胞株诱导制备腹水抗体;用辛酸硫酸铵法纯化抗体,并进行交叉反应检测。结果:获得了稳定分泌抗甘草酸的单克隆抗体杂交瘤细胞株GA-Mab-DF5,腹水抗体纯化后纯度达98%,回收率达80%。线性检测范围为4～64μg.mL-1,R2=0.9986,并且与BSA、明胶、胆酸、去氧胆酸、芍药苷、黄芩苷等无交叉反应。结论:成功获得能稳定分泌甘草酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株,灵敏度、特异性均较高,为样品中甘草酸的快速微量检测及免疫亲和色谱柱制备奠定了基础。
【作者单位】： 北京中医药大学基础医学院;北京中医药大学中药学院;北京中医药大学科学实验中心;
【关键词】： 甘草酸 单克隆抗体 制备 鉴定 杂交瘤细胞株 免疫亲和色谱柱 酶联免疫吸附法
【基金】：国家自然科学基金(30973709;81274043) 北京市重点实验室2011阶梯计划(Z111107055311080) 北京中医药大学创新团队
【分类号】：R392
【正文快照】： 甘草酸(glycyrrhizic acid,GA)是常用中药甘草中最主要的活性成分。甘草或其复方制剂中甘草酸的含量分析主要以高效液相色谱法(HPLC)为主[1],但该方法检测仪器昂贵,检测成本高,耗时长,难以适应环境及市场产品的现场抽查及产品进出口快速通关的要求。酶联免疫吸附法(ELISA)检

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本文编号：870290