强迫游泳应激诱导经前烦躁障碍（PMDD）肝气郁证大鼠模型的制备以及模型大鼠神经递质及其受体的变化

发布时间：2017-09-18 13:13

  本文关键词：强迫游泳应激诱导经前烦躁障碍（PMDD）肝气郁证大鼠模型的制备以及模型大鼠神经递质及其受体的变化

  更多相关文章： PMDD肝气郁证 模型标准化 机制探讨 强迫游泳 单胺类神经递质 GABAAR4α

【摘要】：目的:制备并鉴定出具备符合经前期烦躁障碍(Premenstrual Dysphoric Disorder,PMDD)诊断首要标准的PMDD肝气郁病证属性的大鼠模型,并通过该病证大鼠模型研究,最终形成PMDD肝气郁病证大鼠模型造模和评价的技术方法。同时,以模型为载体,检测各脑区神经递质含量变化及与发病密切相关受体基因和蛋白表达,初步探查其发病机制。方法:本研究采用动物行为实验与神经生化指标检测相结合的方法进行探讨。(1)采用强迫游泳实验的方法,选取间期1期和接受期为测试点,依次进行间期1期、接受期、间期1期3次强迫游泳实验(FST),每次间隔2个周期即9天,筛选出悬浮不动时间等行为参数具有动情周期依赖性的大鼠;(2)对筛选出的大鼠行卵巢切除术后,这种行为表型消失;(3)对卵巢切除大鼠进行外源性性激素诱导人工周期,上病证行为表型又出现;(4)对以上诱导人工周期大鼠“模型”进行氟西汀和舒郁胶囊干预,观察悬浮不动时间等行为参数的动情周期依赖性消失现象,以严格科学证据,证明该病证大鼠模型属于PMDD肝气郁病证大鼠模型;(5)药物干预后采用ELSA试剂盒检测血清及部分脑区中5-HT、NE、GABA在各组间的含量变化,以及采用RT-PCR、western-blot方法检测GABAAR4α的基因和蛋白表达,以初步探查其神经生化机制。结果:(1)采用强迫游泳的方式,筛选出的模型组大鼠的症状发生具有动情周期依赖性:其接受期与非接受期的悬浮不动时间、悬浮不动次数具有显著性差异(P0.05),并且高架十字迷宫实验中时间百分比(OT%)与次数百分比(OE%)也同样出现显著性差异(P0.05),糖水实验模型组与对照组具有显著性差异(P0.05);(2)卵巢切除之后,这种在接受期与非接受期的行为表型差异消失(P0.05);(3)通过外源激素诱导出人工周期后,模型组大鼠在接受期与非接受期的悬浮不动时间、次数,及OT%、OE%又出现显著性差异(P0.05,P0.01);(4)药物干预后,仅模型组存在这种表型差异(P0.05),两个给药组的差异性消失(P0.05);(5) ELSA试剂盒结果显示:5-HT在外周血血清及各脑区中的含量,模型组要比对照组显著降低(P0.05,P0.01);氟西汀组相比模型组除海马脑区外均有显著升高(P0.05);舒郁胶囊组相比模型组在下丘脑中显著性升高,其余脑区及血清中显示升高的趋势。NE在外周血血清中模型组较对照组显著升高(P0.05),给药组较模型组显著降低(P0.05);在脑区中结果相反,模型组较对照组显著降低(P0.05),氟西汀组在下丘脑及海马中较模型组显著升高(P0.05),舒郁胶囊组在额叶及海马中较模型组显著升高(P0.05)。GABA在额叶、下丘脑、海马中的含量,模型组比对照组显著降低(P0.05,P0.01),并且两个给药组比模型组显著升高(P0.05,P0.01)。Western-Blot和RT-PCR显示,GABAAR4α的基因和蛋白表达模型组相比对照组都出现显著性增加(P0.01),氟西汀及舒郁胶囊给药组较模型组显著性降低(P0.05,P0.01)。结论:(1)采用强迫游泳方法筛选的PMDD肝气郁证的大鼠模型符合PMDD诊断首要标准:动情非接受期(相似于经前期)“症状出现”;接受期(相似于经行后卵泡期)“症状减低消失”。并且通过完整的证据链证实这种造模方法的可靠性。(2)在PMDD肝气郁证中,抑郁与焦虑样情绪并行发生,都具有动情周期依赖性,并且其产生的机制,与5-HT等单胺类神经递质以及GABAAR4α的基因和蛋白表达变化密切相关。
【关键词】：PMDD肝气郁证 模型标准化 机制探讨 强迫游泳 单胺类神经递质 GABAAR4α
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 提要3-5
• Abstract5-12
• 引言12-14
• 研究一 PMDD肝气郁证大鼠模型的制备与验证14-36
• 实验一 PMDD肝气郁证大鼠模型的制备14-26
• 1 实验材料14
• 1.1 实验动物14
• 1.2 药品与试剂14
• 1.3 实验仪器14
• 2 实验设计及方法14-18
• 2.1 PMDD肝气郁证大鼠模型的制备方法14-17
• 2.1.1 大鼠饲养14-15
• 2.1.2 大鼠初筛15-16
• 2.1.3 模型的制备16
• 2.1.4 动物分组16-17
• 2.2 行为检测方法17-18
• 2.2.1 强迫游泳17
• 2.2.2 旷场实验17
• 2.2.3 高架十字迷宫实验17-18
• 2.2.4 糖水偏好实验18
• 2.3 统计分析方法18
• 3 结果18-23
• 3.1 强迫游泳实验18-20
• 3.2 旷场实验20-21
• 3.3 高架十字迷宫实验21-22
• 3.4 糖水偏好实验22-23
• 4 讨论23-26
• 实验二 PMDD肝气郁证大鼠模型的检验26-36
• 1 实验材料26-27
• 1.1 实验动物26
• 1.2 药品与试剂26
• 1.3 实验仪器26-27
• 2 实验设计与方法27-28
• 2.1 实验流程27
• 2.2 卵巢切除27
• 2.3 激素诱导27-28
• 2.4 药物干预28
• 2.5 统计分析方法28
• 3 结果28-33
• 3.1 强迫游泳实验（FST）28-30
• 3.2 旷场实验（OFT）30-31
• 3.3 高架十字迷宫实验（EPM）31-33
• 4 讨论33-36
• 研究二 PMDD肝气郁证大鼠模型行为表型及药物干预的神经生化机制初探36-52
• 1 实验材料36-38
• 1.1 实验动物36
• 1.2 材料与试剂36-37
• 1.2.1 ELISA试剂盒36
• 1.2.2 Western Blot36-37
• 1.2.3 RT-PCR37
• 1.3 实验仪器37-38
• 2 实验方法38-43
• 2.1 血清采集及组织取材38
• 2.2 ELISA试剂盒检测方法38-39
• 2.3 蛋白免疫印记实验39-41
• 2.4 实时定量PCR实验41-43
• 2.5 数据处理分析43
• 3 结果43-48
• 3.1 ELSA试剂盒实验结果43-46
• 3.1.1 大鼠血清及各脑区 5-HT含量的检测结果43-44
• 3.1.2 大鼠血清及各脑区NE含量的检测结果44-45
• 3.1.3 各脑区中GABA含量检测结果45-46
• 3.2 Western Blot实验结果46-47
• 3.3 RT-PCR实验结果47-48
• 4 讨论48-52
• 综合分析与初步结论52-58
• 1 PMDD肝气郁证的研究现状52-53
• 2 PMDD肝气郁证大鼠模型研究现状53-54
• 3 PMDD肝气郁证模型制备方法的选择54-55
• 4 与PMDD相关脑区55
• 5 干预药物的选择55-56
• 6 综合结果与分析56-58
• 研究特色与不足58-59
• 结语59-60
• 参考文献60-67
• 附录67-69
• 致谢69-70
• 论文著作70-72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郑莉明;史亚飞;吴皓萌;徐志伟;;中枢5-HT能系统在早发性抑郁中的作用研究[J];中国药理学通报;2015年01期

2 薛丽香;张凤珠;孙瑞娟;董尔丹;;我国疾病动物模型的研究现状和展望[J];中国科学:生命科学;2014年09期

3 李晓娟;白晓晖;陈家旭;刘群;刘sボ，

本文编号：875738