分化诱导剂PMA对THP-1源性巨噬细胞膜表面受体MD-2表达的影响
本文关键词：分化诱导剂PMA对THP-1源性巨噬细胞膜表面受体MD-2表达的影响
【摘要】：目的探索豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)对诱导分化后THP-1细胞膜表面受体髓样分化蛋白-2(MD-2)表达和分布的影响及其与炎症因子TNF-α、IL-6分泌的关系。方法采用PMA梯度剂量(0、1、5、10、50、100 ng/ml)诱导THP-1细胞48 h后观察贴壁细胞形态并计算贴壁率;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测贴壁细胞膜表面受体MD-2、CD14 mRNA相对表达量,ELISA检测细胞培养上清中分泌性MD-2(sMD-2)、TNF-α和IL-6的分泌水平;进一步通过Western blot检测贴壁细胞的MD-2蛋白表达、激光扫描共聚焦显微镜观察MD-2在贴壁细胞的分布和定位。结果梯度PMA剂量(1~100 ng/ml)48 h成功诱导悬浮THP-1细胞贴壁;激光扫描共聚焦显微镜观察显示PMA诱导后MD-2主要表达于胞膜和胞浆,诱导质量浓度增加对MD-2的表达和分布均无显著影响;RT-qPCR检测THP-1细胞经PMA梯度剂量(1~100 ng/ml)诱导后MD-2和CD14 mRNA相对表达量较诱导前均显著升高(P0.01),诱导剂量组之间无显著差异(P0.05);ELISA检测THP-1细胞经PMA梯度剂量(1~100 ng/ml)诱导后,细胞培养上清中的TNF-α、IL-6分泌水平依次显著增加(P0.01),sMD-2仅诱导前后有明显统计学差异(P0.01);Western blot检测显示梯度剂量PMA诱导后细胞内MD-2蛋白表达较诱导前显著增加,诱导剂量组之间无显著差异。结论 1~100 ng/ml PMA均可将THP-1细胞诱导分化为成熟巨噬细胞,增加诱导质量浓度可显著提高炎症因子TNF-α、IL-6的分泌水平,但对其膜表面受体MD-2表达和分布无明显影响。
【作者单位】： 第三军医大学西南医院病理学研究所;
【关键词】： 巨噬细胞 膜受体 髓样分化蛋白- 炎症因子
【基金】：国家自然科学基金(81171848,30700289)
【分类号】：R392.9
【正文快照】： 在创/烧伤及外科重症感染等引起的内毒素血症与脓毒症中,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,也称内毒素)是最重要的致病因子。LPS致病作用的关键在于其通过激活Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)跨膜信号通路,活化以单核/巨噬细胞为代表的宿主免疫细胞,促进细胞因子和炎症
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