造血干细胞移植建立血小板整合素β3胞内段截短体转基因小鼠模型

发布时间：2017-09-19 07:20

  本文关键词：造血干细胞移植建立血小板整合素β3胞内段截短体转基因小鼠模型

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【摘要】：本研究通过逆转录病毒感染整合素β3缺陷小鼠(β3-/-)骨髓造血干细胞再进行骨髓移植建立β3及其胞内段不同截短体的转基因小鼠模型,为进一步研究整合素β3胞内段在血小板双向信号转导途径中的作用提供基础。将整合素β3野生型、β3-Δ759(缺失R760GT762氨基酸片段)和β3-Δ754(缺失T755NITYRGT762氨基酸片段)的cDNA分别克隆至带有GFP编码基因的MSCV MigR1逆转录病毒载体质粒中,用质粒转染BOSC23包装细胞株包装出带有β3全长及不同突变体的逆转录病毒,再感染β3-/-供体小鼠骨髓细胞,尾静脉注射移植入经致死剂量辐照的野生型C57BL/6小鼠体内,移植后6-8周流式细胞术检测GFP和β3的表达率以评估转基因效率。结果表明,成功建立了空载(Vector)、β3野生型和截短突变β3-Δ759、β3-Δ754等4种小鼠模型,血小板转基因成功的比率(即GFP阳性率)为18%-66%,转基因血小板β3表达可达到β3+/-水平。结论:利用逆转录病毒感染的造血干细胞移植建立血小板转基因小鼠模型是一种高通量快速有效的建立转基因小鼠模型的方法,这为进一步研究整合素β3胞内不同区段对血小板整合素信号转导途径的影响及体内对血小板进行基因操作和基因治疗奠定了基础。
【作者单位】： 上海交通大学医学院附属瑞金医院 上海血液学研究所、医学基因组学国家重点实验室;
【关键词】： 血小板整合素β 截短突变 逆转录病毒 转基因小鼠模型 造血干细胞移植
【基金】：国家自然科学基金资助项目,编号81070414
【分类号】：R-332
【正文快照】： 心脑血管血栓性疾病严重影响人类健康,血小板在血栓形成中起着非常重要的作用[1],整合素αIIbβ3(GPIIbIIIa、CD41/CD61)作为血小板表面最丰富的膜糖蛋白,是不同激动剂诱导血小板活化、聚集的最终共同通路,对其阻断可有效抑制各种激动剂诱导的血小板聚集[2]。血小板整合素αII

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本文编号：880286