稳定表达人类疱疹病毒6型U94基因血管内皮细胞株的建立及U94对内皮细胞增殖和血管生成能力的影响

发布时间：2017-09-20 07:44

  本文关键词：稳定表达人类疱疹病毒6型U94基因血管内皮细胞株的建立及U94对内皮细胞增殖和血管生成能力的影响

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【摘要】：目的:构建人类疱疹病毒6型U94基因慢病毒载体,研究U94基因对血管内皮细胞增殖及血管生成的影响。方法:以质粒pSR2PH-U94为模板,PCR扩增U94-6×His片段,克隆至慢病毒载体pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP,经酶切和测序鉴定后,将重组质粒与慢病毒辅助包装元件质粒共转染293T细胞,获得含U94-6×His基因的重组慢病毒。重组慢病毒感染血管内皮细胞EA.hy926,经Blasticidin筛选,RT-PCR和Western blot鉴定,获得稳定表达细胞株。CCK-8和小管形成实验研究U94基因对血管内皮细胞的增殖及血管生成能力的影响。结果:成功构建含U94基因的慢病毒表达载体pLenti-U94-IRES2-EGFP,重组慢病毒经包装、纯化后测得滴度为2.35×107TU/ml。重组慢病毒感染血管内皮细胞EA.hy926,获得能稳定表达U94基因的细胞株EA.hy926-U94。CCK-8及小管形成实验结果显示EA.hy926-U94细胞与阴性对照细胞EA.hy926-NC、正常EA.hy926细胞相比,细胞增殖活性明显降低,小管形成能力变差。结论:成功建立了慢病毒介导的稳定表达U94基因的血管内皮细胞株,研究表明U94可以抑制内皮细胞的增殖及血管生成。
【作者单位】： 南京医科大学微生物与免疫学系;南京医科大学第一附属医院神经外科;南京医科大学发育遗传学系;
【关键词】： 人类疱疹病毒型 慢病毒 U 血管内皮细胞 血管生成
【基金】：国家自然科学基金资助(30972784,81273235,81201520)
【分类号】：R373
【正文快照】： 人类疱疹病毒6型(human herpesvirus 6,HHV-6)是一类嗜人淋巴细胞的双链DNA病毒,于1986年由美国癌症中心的Salahuddin等[1]首先从淋巴增生及人类免疫缺陷综合征(AIDS)患者外周血单个核细胞中分离到,属于疱疹病毒β亚科。HHV-6原发感染一般发生在6个月～2岁的婴幼儿,其后在体

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本文编号：886797