大蒜多糖抑制EB病毒早期抗原、衣壳抗原表达及核酸复制的体外研究

发布时间：2017-09-21 01:37

  本文关键词：大蒜多糖抑制EB病毒早期抗原、衣壳抗原表达及核酸复制的体外研究

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【摘要】：目的:探讨大蒜多糖(Garlic polysaccharide,GPs)对EB病毒早期抗原(Early antigen,EA)和衣壳抗原(Capsid antigen,VCA)表达以及核酸复制的体外作用。方法:采用CCK-8法分别检测GPs作用于Raji细胞和B95-8细胞的安全药物浓度。通过丁酸钠(Na B,4.0 m M/m L)和巴豆油(CTO,500ng/ml)联合诱导Raji细胞表达EB病毒EA和B95-8细胞表达VCA抗原,采用间接免疫荧光(IIF)法观察GPs对EA和VCA表达的影响;荧光定量逆转录PCR(q RT-PCR)检测GPs对EB病毒裂解期关键诱导因子BZLF1表达的影响;同时应用流式细胞术(FCM)检测Raji细胞凋亡情况,以验证该浓度的GPs对细胞为安全浓度。Raji细胞为EB病毒I期潜伏感染,Na B/CTO可诱导EB病毒进入裂解期复制,使用EB病毒核酸定量PCR试剂盒检测GPs对EB病毒核酸复制的影响,并用q RT-PCR观察其对核抗原1(EBNA-1)表达的影响。结果:1、CCK-8法检测结果显示:≤2.00mg/ml的GPs为Raji和B95-8细胞的安全浓度,且24,48和72h的安全浓度是一致的(P0.05)。2、在诱导EA表达的Raji细胞中,与阳性对照组相比,加入1mg/ml GPs组的EA抗原表达的抑制率为12.55%,2mg/ml时为62.70%,差异具有统计学意义(P0.05)。3、在诱导VCA表达的B95-8细胞中,与阳性对照组相比,加入1mg/ml GPs组的VCA抗原表达的抑制率为43.86%,2mg/ml时为66.92%,差异具有统计学意义(P0.05)。4、在诱导EA表达的Raji细胞中检测BZLF1 m RNA发现:1.00和2.00mg/ml的GPs对BZLF1表达的抑制率分别为4.86%(P0.05)和19.44%(P0.05)。5、流式细胞术证实1.00和2.00mg/ml的GPs均不引起Raji细胞凋亡率增加,差异无统计学意义(P0.05),表明GPs确实对EB病毒EA和VCA的表达具有显著的抑制作用。6、EB病毒核酸检测发现:GPs对潜伏期和裂解期的核酸抑制率分别为60.27%和39.06%,对EBNA-1 m RNA的抑制率分别为38.7%和36.4%均具有显著差异(P0.05)。表明GPs对EB病毒核酸复制也有明显的抑制作用。结论:1、在Raji和B95-8细胞中,采用CCK-8法测定GPs的安全药物浓度均为≤2.00mg/ml。2、GPs对EB病毒早期抗原、衣壳抗原的表达以及核酸复制均具有显著的抑制作用,并表现为一定的剂量依赖性。
【关键词】：大蒜多糖 EB病毒 早期抗原 衣壳抗原 EB病毒核抗原-1
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要缩略语英文索引10-11
• 第1章 前言11-15
• 第2章 实验材料15-17
• 2.1 细胞株与药物15
• 2.2 主要实验试剂15-16
• 2.3 主要仪器与器材16-17
• 第3章 实验方法17-25
• 第4章 实验结果25-37
• 第5章 讨论37-41
• 第6章 结论41-43
• 参考文献43-47
• 文献综述 体外抑制 EB 病毒药物的应用研究47-57
• 参考文献53-57
• 硕士期间发表的论文57-59
• 致谢59

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本文编号：891648