弓形虫复合基因疫苗pcSAG1-ROP5诱导小鼠免疫应答的研究

发布时间：2017-09-21 10:37

  本文关键词：弓形虫复合基因疫苗pcSAG1-ROP5诱导小鼠免疫应答的研究

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【摘要】：目的观察弓形虫复合基因疫苗pcSAG1-ROP5免疫小鼠后诱导的免疫应答。方法构建弓形虫重组真核表达质粒pcSAG1、pcROP5和pcSAG1-ROP5,分别通过PCR、酶切和测序鉴定后,转染人宫颈癌细胞(HeLa细胞),蛋白印迹(Western blotting)分析重组蛋白的体外表达情况。70只昆明小鼠随机均分为5组(每组14只),分别为pcSAG1组、pcROP5组、pcSAG1-ROP5组、空质粒组和空白对照组。重组质粒组每次每只肌注100μg重组质粒,每2周免疫1次,共3次。空质粒组和空白对照组分别注射等量的空质粒和PBS。于每次免疫前和末次免疫后2周眼眶采血,制备血清。采用ELISA法检测pcSAG1-ROP5组小鼠末次免疫后2周的血清与重组蛋白SAG1、ROP5和SAG1-ROP5结合的效价,以及5组小鼠的各次血清中抗弓形虫抗体IgG水平。末次免疫后3周,每组小鼠取10只腹腔接种10~3弓形虫速殖子,观察生存时间。末次免疫后4周,采用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平。结果重组真核表达质粒构建成功。Western blotting分析结果显示,重组质粒pcSAG1、pcROP5和pcSAG1-ROP5均能在HeLa细胞中表达,重组蛋白的相对分子质量(M_r)分别为31000、57000和88 000。pcSAG1-ROP5组小鼠血清与重组蛋白SAG1、ROP5和SAG1-ROP5结合的效价分别为1:320、1:160和1:2560。3个重组质粒组小鼠血清抗弓形虫IgG抗体水平随着免疫次数的增加和时间的延长逐渐升高,末次免疫后2周,pcSAG1-ROP5组小鼠血清IgG抗体水平(0.612±0.031)显著高于其他各组(P0.05)。攻击感染后,pcSAG1-ROP5组小鼠的平均存活时间为(288±7)h,较pcSAG1组和pcROP5组分别延长了48 h和96 h(P0.05)。末次免疫后4周,pcSAG1-ROP5组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ水平[(908.52±6.31)pg/ml]显著高于其他各组(P0.05),各组的IL-4水平差异无统计学意义(P0.05)。结论与弓形虫单基因疫苗pcSAG1和pcROP5相比,复合基因疫苗pcSAG1-ROP5所诱导的抗弓形虫IgG抗体和IFN-γ水平较高,攻击感染后存活时间延长。
【作者单位】： 海南医学院海南省热带病重点实验室;
【关键词】： 刚地弓形虫 复合基因疫苗 SAG-ROP
【基金】：海南省自然科学基金(No.809018)~~
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 刚地弓形虫(几%oplaslna gondii)是一种世界性分布的专性细胞内寄生原虫，可感染包括人类在内的几乎所有哺乳动物，引起人兽共患寄生虫病。目前弓形虫病药物治疗的效果不甚理想，疫苗接种可能是预防弓形虫病的最佳策略川。弓形虫生活史较复杂，抗原成分多，每种抗原在体内诱

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 杨婷婷,何深一,张加勤,周怀瑜,丛华,古钦民,李瑛,赵群力;弓形虫SAG1单基因疫苗与SAG1-ROP2复合基因疫苗的免疫效果观察[J];中国人兽共患病杂志;2005年05期

【共引文献】

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1 孙怡;何深一;丛华;杨婷婷;周怀瑜;古钦民;李瑛;赵群力;;弓形虫SAG1-SAG2复合DNA疫苗免疫小鼠诱导的免疫保护性[J];国际医学寄生虫病杂志;2006年01期

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3 徐凤全,林玲;我国弓形虫病核酸疫苗研究概况[J];中国热带医学;2005年08期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

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中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 祁光宇;弓形虫自然弱毒株（QHO）棒状蛋白2基因片段的克隆、表达及鉴定[D];甘肃农业大学;2007年

【二级参考文献】

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1 杨婷婷,何深一,蒋华,古钦民,丛华,周怀瑜,张加勤,李瑛,赵群力;弓形虫主要表面抗原p30单价及复合基因疫苗的构建[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2005年01期

【相似文献】

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1 郑斌;尹志奎;何蔼;詹希美;;重组刚地弓形虫MIC8 CTD蛋白及其多克隆抗体的制备[J];中国病原生物学杂志;2011年08期

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本文编号：894011