大鼠骨髓间充质干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的标志基因表达受组蛋白乙酰化调控

发布时间：2017-09-22 00:02

  本文关键词：大鼠骨髓间充质干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的标志基因表达受组蛋白乙酰化调控

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【摘要】：目的通过骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)与膀胱平滑肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)接触共培养探讨组蛋白乙酰化对BMSCs分化能力的影响。方法分别采用密度梯度离心法和胶原酶消化法培养大鼠BMSCs及BSMCs至第3代,并对BMSCs进行了鉴定;以单独培养的BMSCs作为对照组,接触共培养的BMSCs为实验组;运用免疫荧光化学染色法分别对2组BMSCs中的平滑肌标志性蛋白平滑肌α肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle-myosin heavy chain,SM-MHC)、Calponin进行检测,Western blot检测α-SMA蛋白、Calponin蛋白在BMSCs中的表达,并用微球菌核酸酶(micrococcal nuclease,MNase)对平滑肌3个标志性基因的启动子区进行了染色质开放性的检测,同时运用了ChIP技术分析了α-SMA、SM-MHC启动子区组蛋白乙酰化水平对BMSCs向平滑肌分化的影响。结果大鼠原代BMSCs流式检测显示CD29表达阳性,阳性率为99.8%,CD31、CD45表达阴性,阳性率为6.30%、1.04%;免疫荧光显示平滑肌3种标志性蛋白的表达均随时间的延长而增加;Western blot结果显示随着共培养天数的增加α-SMA蛋白、Calponin蛋白在实验组中的表达相比对照组有明显的增加;MNase显示实验组的BMSCs启动子区染色质对核酸酶的敏感性明显高于对照组,ChIP显示实验组中BMSCs平滑肌标志性基因α-SMA、SM-MHC、Calponin启动子区H4乙酰化水平较未分化前明显增加(P0.05)。结论组蛋白乙酰化程度的增加促进了BMSCs向BSMCs分化。
【作者单位】： 第三军医大学西南医院妇产科;
【关键词】： 骨髓间充质干细胞 膀胱平滑肌细胞 组蛋白乙酰化 启动子
【基金】：国家自然科学基金青年科学基金(30801234)~~
【分类号】：R322.62
【正文快照】： 压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)指咳嗽或喷嚏等腹压增高的情况下出现的不自主的尿液自尿道外口流出[1-2]。有研究发现,女性患压力性尿失禁的几率与年龄增长呈正相关,年龄越大,患病率越高,平均高发年龄在45~55岁。病因多与盆底松弛、雌激素减少和尿道括约肌退

【参考文献】

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本文编号：897608