重组人EGFL6在HEK293细胞中的瞬时表达

发布时间：2017-09-25 12:07

  本文关键词：重组人EGFL6在HEK293细胞中的瞬时表达

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【摘要】：旨在通过构建EGFL6的真核表达载体,在HEK293T细胞中进行表达,并利用HEK293T细胞表达的EGFL6条件培养基,探讨EGFL6对人黑色素瘤A375细胞和人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。利用PCR方法亚克隆得到的EGFL6基因片段及EGFP基因片段,用重叠PCR方法构建成EGFP-EGFL6融合基因片段,并分别将测序正确的EGFP-EGFL6融合基因片段及EGFP基因片段构建到真核表达载体pAAV中。表达载体质粒去内毒素纯化后,瞬时转染HEK293T细胞进行表达,荧光定位分析和Western blot检测EGFL6的表达。CCK-8试验分析含EGFP-EGFL6融合蛋白的HEK293T条件培养基对A375细胞和SKOV3细胞的增殖能力的影响。结果显示,酶切鉴定pAAV-EGFP-EGFL6和pAAV-EGFP两个重组表达载体均构建成功;EGFP荧光定位及Western blot结果均显示EGFP-EGFL6在HEK293T细胞中成功表达;增殖抑制试验结果显示EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖,对肿瘤细胞的促增殖率分别达到(37.79±14.05)%和(30.53±6.31)%。成功地将EGFP应用于EGFL6真核表达载体的构建与表达,结果表明人EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖。
【作者单位】： 广东省分子免疫与抗体工程重点实验室
【关键词】： EGFL 瞬时表达 HEKT 肿瘤细胞
【基金】：国家“863”项目(2009AA02Z112) 中央高校基本科研业务费专项资金项目(21612112)
【分类号】：R363;Q78
【正文快照】： Yeung等[1]于1999年首次用DNA分子杂交高通量筛选的方法,发现了一个新的EGF重复域超家族成员,并将其命名为表皮生长因子样结构域蛋白6(EGF-like-domain,multiple 6,EGFL6)。Buchner等[2]也发现了这个蛋白,命名为MAEG(MAM-andEGF-containing gene),定位于Xp22染色体上。后续的

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本文编号：917252