ANKIB1单克隆抗体的制备及应用

发布时间：2017-09-26 02:14

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【摘要】：目的:制备抗人ANKIB1的小鼠单克隆抗体。方法:PCR扩增人ANKIB1(1-480)的编码序列,构建pGEX-5X-ANKIB1(1-480)表达载体。在大肠杆菌中诱导表达GST-ANKIB1(1-480),利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化重组蛋白。使用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot和免疫沉淀实验鉴定抗体,并检测ANKIB1在哺乳动物细胞中的表达。结果:获得了一株杂交瘤细胞株(7A9),所分泌的抗体对人、大鼠和小鼠ANKIB1均具有很高的灵敏性和特异性。ANKIB1在哺乳动物细胞中高表达。结论:成功制备了抗ANKIB1的单克隆抗体,ANKIB1在人、大鼠和小鼠脑以及人胚肾细胞293ET中均有较高水平的表达。
【作者单位】： 新乡医学院生命科学技术学院 河南省"遗传性疾病与分子靶向药物"高校重点实验室培育基地;新乡医学院基础医学院免疫学教研室;新乡医学院第三附属医院妇产科;
【关键词】： ANKIB 单克隆抗体 表达 RBR结构域
【基金】：新乡医学院博士科研启动基金资助
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 锚蛋白重复序列(Ankyrin repeat,ANK)是最常见的一种介导蛋白质-蛋白质相互作用的蛋白模体,常与F-box、锌指、PDZ(PSD-95/Dlg/ZO-1)、离子转运结构域和蛋白激酶等结构域共存,其中F-box与蛋白质泛素化密切相关[1-3]。RING(Really interest-ing new gene)结构域则是E3泛素连接酶

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