抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体的制备及活性分析

发布时间：2017-09-28 05:38

  本文关键词：抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体的制备及活性分析

  更多相关文章： 鼠疫 F 嵌合抗体 中国仓鼠卵巢细胞

【摘要】：目的在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体,并对其活性进行分析。方法将具有保护活性的鼠源单克隆抗体(mAb)的轻、重链可变区基因,分别与人κ型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建轻重链嵌合抗体基因,克隆到T载体上进行序列测定确证。然后分别构建含有嵌合轻、重链基因的表达载体pcDNA3.1-L和pcDNA3.1-H。构建完成的表达载体电转化CHO-S细胞,G418筛选获得稳定表达细胞株。扩大培养、收集上清用MabSelect Sure亲和层析填料纯化。纯化后的抗体进行SDS-PAGE、ELISA、Western blot分析以及小鼠体内保护活性评价。结果 PCR鉴定及测序结果表明pcDNA3.1-H和pcDNA3.1-L构建完成,序列正确;Dot blot结果表明获得表达量高的稳转株细胞;SDSPAGE及Western blot法证明抗体纯化获得成功,ELISA结果表明该抗体具有结合与F1抗原的活性;小鼠体内攻击实验表明其保护活性与鼠mAb大致相同。结论成功在CHO-S细胞中表达了具有中和活性的抗F1人-鼠嵌合抗体。
【作者单位】： 解放军军事医学科学院生物工程研究所疫苗与抗体工程研究室;
【关键词】： 鼠疫 F 嵌合抗体 中国仓鼠卵巢细胞
【基金】：国家自然科学基金(81000710) “重大新药创制”科技重大专项(2013ZX09304103)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 鼠疫是一种自然疫源性疾病,可独立在动物中流行,全世界有各种类型的动物自然疫源地,难于彻底消除。我国仍有11个疫源地省区,人间鼠疫时有发生[1]。另外,鼠疫菌被列为重要的生物战剂和生物恐怖剂,一直受到高度重视。更为重要的是多药抗性鼠疫菌的发现,使得鼠疫的治疗更是雪上加

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李冰;李建民;徐俊杰;刘树玲;张羽;付玲;陈薇;;抗炭疽保护性抗原单克隆抗体可变区基因的克隆及序列分析[J];生物技术通讯;2007年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 李鹏;刘凤权;杨慧;赵丽;李霞;;锌螯合物抗体可变区的克隆鉴定、真核表达及重组抗体的三维模建[J];生物技术通报;2012年01期

2 李冰;张军;徐俊杰;刘树玲;付玲;李建民;陈薇;;人源化抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原单链抗体的设计和表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年02期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 赵丽;三种重金属单抗的制备与抗体基因序列分析及其免疫检测方法的建立[D];内蒙古农业大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 李莹;应对生物恐怖袭击医学防治技术的情报研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 徐俊杰,张军,刘树玲,吕天敬,陈薇,李冠霖,葛猛,郭强;针对炭疽保护性抗原不同结构域的中和性单克隆抗体的筛选和鉴定[J];微生物学报;2005年06期

2 周昌奎;嵌合抗体的基因克隆、表达及应用前景[J];细胞与分子免疫学杂志;1995年01期

3 陈志南,邢金良,杨向民,宋斐,张思河;抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fd及轻链基因的克隆与鉴定[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2003年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 杨林,林纪春,徐秉臣;ELISA双抗体夹心法检测FI抗原在鼠疫菌鉴定中的初步应用[J];地方病通报;1987年03期

2 小次仁,陈虹,于德江;自尸体一手指骨检出鼠疫菌的报告[J];西藏医药杂志;1993年02期

3 董兴齐;鼠疫菌质粒种类功能及在流行病学中的应用进展[J];预防医学情报杂志;1994年03期

4 顾峰,申晶,宋志忠,杨桂荣,赵铭山;感染鼠疫菌的植物作为传染源的研究[J];中国地方病防治杂志;1998年03期

5 汪立茂,宋晓玉,薛梅,李富忠,蒋和柱,王晓;四川省首次检出鼠疫菌情况分析[J];中国地方病防治杂志;1999年05期

6 谷春广,张春华,丛显斌,闫卫东,徐国鑫,王忠惠,岳明祥,赵铭山,张晶仁;吉林西北部草原鼠疫菌表型性状的研究[J];中国地方病防治杂志;2000年04期

7 王忠惠,谷春广,张春华,闫卫东,丛显斌,徐国鑫,岳明祥,张晶仁;吉林西北部草原鼠疫菌外膜蛋白的研究[J];中国地方病防治杂志;2001年04期

8 戴瑞霞,金丽霞,祁芝珍;西藏藏南地区鼠疫菌某些生物学特征及流行病学分析[J];中国地方病防治杂志;2001年06期

9 孙利仁,张春华,丛显斌,刘振才;鼠疫菌质粒及变异分析[J];中国地方病防治杂志;2002年03期

10 徐成,房静,孙启庭,孙鑫广,张铁军;蚤与鼠疫菌之间的生物学关系[J];中国地方病防治杂志;2002年06期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 热娜·吐尔地;徐秉臣;阿扎提·热合木;孙石;雷刚;;酶免疫染色法快速检验鼠疫菌[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年

2 张雪;张爱华;闭兰;赵亚杰;孙可芳;方志正;;抗人T淋巴细胞CD4人-鼠嵌合抗体真核表达的研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

3 刘兢;李平;程联胜;;抗肿瘤表面抗原P185~(erbB-2)单克隆抗体的工程化嵌合抗体的制备和性质鉴定[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年

4 董兴齐;张洪英;彭和碧;Chu C.May;;鼠疫菌—新质粒的限制性酶切图谱[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年

5 王准;胡洪波;崔莲仙;何维;;γδTCR CDR3嵌合抗体抗肿瘤的初步研究[A];第九届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2006年

6 宋亚军;;鼠疫耶尔森氏菌比较与进化基因组学研究[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年

7 李永;黄建华;杨其彬;周发林;江世贵;;斑节对虾2个地理种群自交与杂交F1代生长性能研究[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年

8 赵万里;王胜;;从奥运竞技场到F1赛车场亚科线性排水技术大显身手[A];2010年全国给水排水技术信息网年会论文集[C];2010年

9 陈江;;野生日本鸣鹑和家鹑杂交F1育性研究[A];苏州市自然科学优秀学术论文汇编(2008-2009)[C];2010年

10 刘奕;董艳秋;刘兢;;稳定高表达anti-p185嵌合抗体的细胞株的筛选和鉴定[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 张丽华;上海F1赛事新季寻策生意之外搭建“第二外交平台”[N];第一财经日报;2011年

2 记者 周轩千;F1社会效益大于经济效益[N];上海金融报;2011年

3 特约记者 衣鹏;上海F1演变[N];21世纪经济报道;2009年

4 王雪飞;鼠疫检测新技术身手不凡 30分钟内锁定鼠疫菌及抗体[N];健康报;2007年

5 ;普巴软件：F1协同管理平台[N];中国计算机报;2010年

6 江一宁;自贡大学生开发“概念车”比F1赛车还要苗条[N];四川科技报;2008年

7 记者 范京蓉;F1摩托艇世锦赛拉开战幕[N];深圳特区报;2008年

8 北京华旗资讯科技发展有限公司副总裁 张永捷　黄光伟;爱国者支持F1迈凯轮车队[N];电脑商报;2008年

9 靳文东;F1代进口仙客来品种应用指南[N];中国花卉报;2008年

10 通讯员 刘华　马香;F1——1600轻型泥浆泵在宝石公司研制成功[N];中国石油报;2010年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 朱志刚;抗CD45人—鼠嵌合抗体的构建、表达与鉴定[D];南方医科大学;2010年

2 李建民;抗基孔肯亚病毒单克隆抗体人源化及真核细胞高效表达研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

3 林周;人TNF-α嵌合抗体体外亲和力成熟作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

4 胡洪波;γδT细胞抗原识别机制研究—含γδTCR CDR3δ序列嵌合抗体的构建及其抗原结合特异性和SARS相关冠状病毒B细胞抗原表位的筛选[D];中国协和医科大学;2005年

5 谭亚芳;鼠疫耶尔森氏菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白YopK在致病机制中的作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年

6 王玉刚;基于计算机辅助分子设计的抗CD20单克隆抗体的改造[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

7 陈泽良;鼠疫耶尔森氏菌密度感应系统与毒力关系研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

8 李蓓;鼠疫耶尔森氏菌候选疫苗靶标的筛选与初步验证[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年

9 寇庚;SM5-1单克隆抗体的人源化及其体内外抗肿瘤作用研究[D];第二军医大学;2004年

10 周蕾;鼠疫耶尔森氏菌密度感应系统研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 汪洁英;鼠疫双组分疫苗的免疫学评价[D];福建医科大学;2011年

2 刘轶然;示踪鼠疫菌构建及吞噬细胞对其吞噬能力的观察[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年

3 尚帅;载鼠疫亚单位疫苗的多孔微球[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年

4 胡翠平;百合杂交F1代遗传变异性状分析[D];东北农业大学;2013年

5 张晓晓;抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体真核表达载体的构建及表达[D];第四军医大学;2012年

6 魏嘉良;蜱传媒病中鼠疫、野兔热病原检测方法的建立及疫病情况调查[D];吉林农业大学;2013年

7 张全爱;组织因子人—鼠嵌合抗体制备的研究[D];山西大学;2010年

8 王旺;鼠疫亚单位疫苗的制备及其在猕猴中的免疫保护作用评价[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年

9 姜慧;1942年河套地区鼠疫研究[D];内蒙古大学;2012年

10 化晓莉;抗人CD40人—鼠嵌合抗体的构建表达及功能的初步研究[D];苏州大学;2010年

，

本文编号：934097