Notch1胞内结构域真核表达质粒构建及在H9c2心肌样细胞的表达和生物学功能

发布时间：2017-09-28 06:15

  本文关键词：Notch1胞内结构域真核表达质粒构建及在H9c2心肌样细胞的表达和生物学功能

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【摘要】：目的构建Notch l胞内结构域(N1ICD)真核表达质粒,确定能在H9c2心肌样细胞内表达,并发挥生物学效应,为后续Notch1信号通路的研究提供实验依据。方法设计并合成1对含有BamH I和EcoR I酶切位点的特异性引物,以小鼠cDNA文库为模板,经PCR扩增得到了1 122 bp的目的片段,定向克隆至pcDNA 3.1/myc-His质粒,构建pcDNA3.1/N1ICD-myc-His真核表达质粒。通过双酶切及基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至H9c2心肌样细胞,48 h后提总蛋白,Western-blotting检测myc和Hes1,确定N1ICD能在H9c2细胞表达,并启动下游基因表达。结果表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His双酶切及基因测序正确,N1ICD可在H9c2心肌样细胞内高效表达,具有Notch1生物学效应。结论真核表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His构建成功,为Notch1信号通路在心血管领域的功能研究奠定了基础。
【作者单位】： 南昌大学第一附属医院心脏外科;
【关键词】： Notch信号通路 胞内结构域 质粒构建 Hc心肌样细胞
【基金】：国家自然科学基金(No:81260024) 江西省研究生创新专项资金(No:YC2011-B013)
【分类号】：R363
【正文快照】： Notch信号通路为邻近细胞之间信息交流平台,在心脏中的突出作用不容忽视,它不仅调节胚胎期心脏的发育和分化[1],而且刺激未成熟心肌细胞的增殖[2],促进静止期心肌细胞重新进入细胞周期,有利于损伤心肌的再生修复[3]。最新研究发现Notch1信号通路的激活可加快心肌梗死后期心功

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本文编号：934230