携带eGFP基因慢病毒颗粒的制备及鉴定

发布时间：2017-09-28 18:02

  本文关键词：携带eGFP基因慢病毒颗粒的制备及鉴定

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【摘要】：目的:通过eGFP基因慢病毒颗粒的包装和感染,明确重组慢病毒对外源基因在细胞中的转导能力。方法:把慢病毒质粒Lv105-eGFP转染到293 Ta细胞中并包装为慢病毒颗粒,经电镜检测病毒颗粒和实时定量PCR(qPCR)测定病毒滴度,之后感染H1299细胞,通过荧光显微镜观察比较eGFP在靶细胞中的表达效率。结果:eGFP在包装细胞中转染和表达效率在48h时达90%以上,到72h时细胞病变效应(CPE)逐渐显著;电镜检测可看到典型的慢病毒颗粒形态特征;病毒原液的滴度是4.4×107VG/mL、浓缩液的是2.68×1010VG/mL;1μL病毒原液感染H1299细胞时,eGFP表达水平可达10%、增加到100μL感染时表达水平达到99%以上,证明eGFP基因得到有效转导并可在细胞中高水平表达绿色荧光蛋白。结论:成功包装了eGFP慢病毒颗粒并可在靶细胞中获得高效表达。
【作者单位】： 中国医学科学院 北京协和医学院医学生物研究所;云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;
【关键词】： 增强绿色荧光蛋白 慢病毒颗粒 包装 细胞 表达
【基金】：协和青年科研基金项目(“hFGF21对Ⅱ型糖尿病的靶向基因治疗研究”,2012D14)资助 云南省应用基础研究面上项目(“抵抗素与饮食诱导的Ⅱ型糖尿病猕猴模型的关联性研究”,2009ZC185M)资助
【分类号】：R373
【正文快照】： 0引言目前进行基因治疗较为常用的病毒载体是Ad和AAV等[1,2],但都只能实现治疗基因的瞬时表达,难以形成稳定表达而发挥长效功能。慢病毒载体(Lentiviral vectors)是以人类免疫缺陷病毒-1(human immunodeficiency virus1,HIV-1)来源为主要代表改造而来的一类病毒载体,携带有外

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 陈泽;林冬;王敏;;PIG7慢病毒表达载体的构建[J];生物技术;2006年04期

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【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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9 马海燕;方_g聃;张敬之;;应用荧光实时定量PCR方法检测重组慢病毒滴度及其感染效率[J];生命科学研究;2009年05期

10 苏胜彦;陈为先;马佳璐;张勇;胡鹏晨;闻剑e，

本文编号：937256