大鼠枯否细胞的分离、鉴定以及LPS刺激诱导TNF-α的表达

发布时间：2017-09-29 20:21

  本文关键词：大鼠枯否细胞的分离、鉴定以及LPS刺激诱导TNF-α的表达

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【摘要】：目的:分离、培养和鉴定枯否细胞,并探讨LPS刺激对细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达和分泌的影响.方法:采用在体原位灌注、密度梯度离心和早期细胞换液等方法分离纯化大鼠肝枯否细胞(kupffer cell,KC),并采用墨汁吞噬和ED2染色试验对分离培养的细胞进行鉴定.TNF-α表达和分泌采用RT-PCR和酶联免疫技术(enzyme-linked immunosorbent,ELISA)检测.结果:成功分离和纯化大鼠肝KC,并经墨汁吞噬和ED2染色试验鉴定证实;LPS刺激KC细胞内TNF-α mRNA的表达较非刺激细胞(PBS处理细胞)显著升高(1.10±0.02vs0.09±0.01,P0.001).另外,LPS刺激较非刺激KC培养上清液TNF-α蛋白的水平也显著升高(487.10pg/mL±5.56pg/mLvs39.41pg/mL±15.30pg/mL,P0.001).结论:原位灌注和密度梯度离心法能有效分离纯化大鼠KC,LPS刺激可诱导其表达和分泌大量TNF-α.
【作者单位】： 上海交通大学附属第一人民医院松江分院;南昌大学第二附属医院;
【关键词】： 枯否细胞 培养 脂多糖 肿瘤坏死因子-α
【基金】：国家自然科学基金资助项目,Nos.81070357,30660066~~
【分类号】：R329
【正文快照】： 0引言枯否细胞(kupffer cell,KC)是一种非实质性肝细胞,其数量约占肝细胞总数的15%和体内组织驻留巨噬细胞总数的80%-90%[1].KC被覆于肝窦内壁,在稳定或生理情况下,可作为“专业化”的吞噬细胞[2],以清除衰老的红细胞、免疫复合物和来自门脉循环的肠源性细菌产物[1].在功能上,

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 曾仲;黄汉飞;宋飞;段键;;体外灌注法分离大鼠肝脏Kupffer细胞及原代培养[J];世界华人消化杂志;2009年25期

2 张磊;黄成;李俊;吕雄文;朱鹏里;王建青;李增;贺晓昕;;大鼠肝星状细胞和枯否细胞的分离与培养方法[J];安徽医科大学学报;2007年06期

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本文编号：944053