抗VEGFR-2全人源IgG1抗体的构建及其在CHO-k细胞中的表达

发布时间：2017-09-30 19:30

  本文关键词：抗VEGFR-2全人源IgG1抗体的构建及其在CHO-k细胞中的表达

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【摘要】：本文在实验室构建的单链抗体-Fc融合抗体[scFv(AK404R)-Fc]的基础上构建抗VEGFR-2全人源IgG1样全长抗体(Mab-04)。利用重叠PCR,获得Mab-04的轻链和重链的核酸序列后分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1,获得重组质粒。脂质体法将重组质粒转染至CHO-k细胞,经Protein A柱纯化细胞培养上清液获得目的蛋白,利用Western blotting检测目的蛋白,ELISA检测Mab-04与抗原亲和力。测序表明重组质粒构建成功,Western blotting检测显示目的蛋白成功表达(1μg·mL-1),ELISA检测阐明该抗体能与抗原结合并呈浓度依赖性(IC50为50 nmol·L-1),表明Mab-04成功表达并正确装配,为进一步大量制备该抗体及其活性研究打下基础。
【作者单位】： 中国药科大学天然药物活性组分与药效国家重点实验室 生命科学与技术学院;
【关键词】： VEGFR- 全长抗体 抗肿瘤血管生成
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81072561,81102364) 天然药物活性组分与药效国家重点实验室资助项目(JKGP201101) 江苏省青蓝工程项目(2010)
【分类号】：R392
【正文快照】： 血管生成是肿瘤发生、发展的必要条件,而血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factorreceptor,VEGFR)作为血管生成关键因子VEGF的受体也成为抗肿瘤药物的靶向研究热点[1]。VEGFR有3种亚型:Flt1(VEGFR-1)、KDR(VEGFR-2)、VEGFR-3,其中VEGFR-2与VEGF具有高亲和力

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本文编号：950004