狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

发布时间：2017-10-03 01:01

  本文关键词：狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

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【摘要】：目的以原核表达的狂犬病病毒M蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测狂犬病病毒抗体。方法为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M),采用RT-PCR方法从狂犬病病毒Flury-LEP株中扩增RV基质蛋白基因,双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-M。将重组质粒pET-M转化至宿主菌E.coli Rosetta中进行表达。SDS-PAGE和Western blot分析确定蛋白表达量和特异性。用纯化的重组M蛋白作为包被抗原建立检测犬RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量、血清的最佳稀释度、Protein A-HRP的最佳稀释度。结果经PCR、双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-M构建成功,将重组质粒进行转化后诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析得到高效表达的M蛋白,重组蛋白可被RV阳性血清特异性识别,表明基质蛋白具有良好的反应原性。用表达的狂犬病病毒M蛋白建立了检测RV抗体的间接ELISA方法,用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对93份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为89.2%。结论用原核表达的重组M蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法可用做检测犬RV抗体水平的参考。
【作者单位】： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室农业部兽用药物与兽医生物技术北京科学观测实验站;
【关键词】： 狂犬病病毒 基质蛋白 原核表达 蛋白纯化 酶联免疫吸附试验
【基金】：国家自然科学基金(No.31172342) 国家高技术研究发展计划“863”计划(No.2008AA10Z411) 北京市科委基金项目(No.Z07010501780701) 国家农业行业公益项目(No.200903037) FAO/IAEA项目(No.14133,No.14515,No.17453)联合资助~~
【分类号】：S855.3;R373
【正文快照】： 狂犬病是由狂犬病病毒(Rabies virus,RV)引起的人兽共患病,可感染几乎所有的温血动物。近年来,我国狂犬病疫情一直呈上升趋势,病死数据居我国37种法定报告传染病之首,据最新卫生部公布的数据,中国年均2 400人以上的狂犬病死亡人数,仅次于印度,位居全球第二,造成这种形势的主

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本文编号：962228