小鼠miR-125b慢病毒过表达载体构建与鉴定

发布时间：2017-10-03 10:31

  本文关键词：小鼠miR-125b慢病毒过表达载体构建与鉴定

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【摘要】：目的构建小鼠胰腺β细胞NIT-1中miR-125b慢病毒过表达载体。方法从小鼠基因组DNA中用PCR扩增miR-125b的前体序列,经NheⅠ和PstⅠ酶切后连接到Lv-CMV-GFP载体中,并对重组质粒进行双酶切鉴定和测序分析。将miR-125b过表达载体、pVSV-G和delta8.91质粒共转染293T细胞,收获慢病毒感染NIT-1细胞,流式细胞术分选阳性细胞,RT-PCR鉴定稳转细胞株中miR-125b的表达。结果成功构建了miR-125b慢病毒表达载体,感染小鼠胰腺β细胞NIT-1后能够成功过表达miR-125b。结论成功构建miR-125b慢病毒过表达载体,为进一步研究其功能建立了实验基础。
【作者单位】： 南京医科大学第一附属医院胆胰外科;
【关键词】： miR-b 慢病毒过表达载体 胰腺β细胞
【基金】：江苏省高校优势学科建设工程(PAPD)
【分类号】：R-332
【正文快照】： 微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长19-25bp的单链非编码小分子RNA,它们能通过与靶基因mRNA 3′-非翻译区(UTR)特异性的碱基配对导致其降解或翻译阻遏,在转录后水平调控靶基因的表达[1]。近年来研究发现,miRNA参与了包括细胞发育、增殖、凋亡等生理过程及心血管疾病、神经系统

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本文编号：964698