miR-378负性调节caspase-3蛋白表达减轻氧-糖剥夺致小鼠N2A细胞缺血损伤

发布时间：2017-10-05 03:35

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【摘要】：目的探讨miR-378在氧-糖剥夺(OGD)致小鼠成神经瘤N2A细胞缺血损伤中的作用及其可能分子机制研究。方法离体培养N2A细胞,采用3 h OGD/24 h复糖复氧模拟缺血/再灌细胞模型,3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测N2A细胞生存率,蛋白印迹(Western blot)检测caspase-3蛋白表达,实时定量RT-PCR检测miR-378和caspase-3 mRNA表达,荧光素酶报告基因验证miR-378对caspase-3 mRNA 3'非翻译区(UTR)的直接调控作用。结果 miR-378在N2A细胞内表达水平,随着3 h OGD复糖复氧时间的增加,而显著降低(P0.05,n=5);在3 h OGD/24 h复糖复氧致N2A细胞缺血损伤中,上调或下调miR-378的表达水平可显著提高或降低N2A细胞生存率(P0.05,n=6);而在非OGD条件下,miR-378表达水平改变对N2A细胞生存率则无明显影响;同样,在3 h OGD/24 h复糖复氧条件下,miR-378表达水平的改变可显著影响caspase-3蛋白表达(P0.05,n=3)而非caspase-3 mRNA表达水平;共转染pri-miR-378可显著抑制含caspase-3 mRNA 3'-UTR的荧光素酶报告基因的表达(P0.05,n=6)。结论 miR-378可通过负性调节caspase-3蛋白表达水平,来减轻OGD致N2A细胞缺血损伤,所获实验结果有助于从miRNAs水平为缺血性脑卒中提供潜在的治疗靶点。
【作者单位】： 首都医科大学神经生物学系北京脑重大疾病研究院;首都医科大学附属北京朝阳医院神经内科;
【关键词】： 氧-糖剥夺 缺血性损伤 miR- caspase- NA细胞
【基金】：国家自然科学基金(31071048,31171147,31200895) 科技部973计划前期研究专项(2011CB512109) 北京市自然科学基金(7132025,7132070)
【分类号】：R363
【正文快照】： 目前临床治疗脑卒中缺乏有效的治疗措施。缺血/低氧预适应(ischemia/hypoxic preconditioning,I/HPC)的发现,为临床防治缺血/低氧性疾病提供了新思路。脑I/HPC分为两种类型:早期I/HPC和晚期I/HPC。早期I/HPC以细胞内的信号传导通路改变为主;晚期I/HPC则是以细胞内基因表达的改

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本文编号：974574