miRNA-122促进小鼠胚胎干细胞源性肝前体细胞的分化与成熟

发布时间：2017-10-07 05:10

  本文关键词：miRNA-122促进小鼠胚胎干细胞源性肝前体细胞的分化与成熟

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【摘要】：目的:通过miRNA-122(miR-122)转染胚胎干细胞(ESCs)源性肝前体细胞,观察及评估其是否能推进ESCs向肝细胞的分化过程。方法:采用丁酸钠、成纤维细胞生长因子4(FGF-4)及地塞米松(Dex)联合序贯诱导小鼠ESCs使之初步分化为肝前体细胞,然后利用Gateway技术构建出pAV.Ex1d-CMVmiR122/IRES/eGFP重组腺病毒表达载体,使其转染贴壁诱导第9天的小鼠ESCs源性肝前体细胞,获得稳定高表达miR-122的细胞后继续培养。采用荧光显微镜观察转染后细胞形态的变化;使用real-time RT-PCR检测肝特异性基因的表达;免疫荧光检测肝特异性蛋白表达水平;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验检测肝细胞功能。结果:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞。转染miR-122后,细胞在形态学上更接近成熟肝细胞;肝特异性基因白蛋白(ALB)、甲状腺素运载蛋白、α1抗胰蛋白酶、葡萄糖-6-磷酸酶、细胞角蛋白8、胆固醇7α-羟化酶及细胞色素P450 3A4的mRNA表达均增高;肝特异性蛋白ALB及细胞角蛋白18均表达增高,而甲胎蛋白表达降低;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验结果均显示转染miR-122后肝细胞功能较对照组明显增强。结论:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞;miR-122能够有效地促进小鼠肝前体细胞的分化与成熟。
【作者单位】： 中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科;
【关键词】： 胚胎干细胞 肝细胞 miRNA-
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.30872700)
【分类号】：R329
【正文快照】： 由于具有自我更新、高度增殖和多向分化的能力,胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)为多种难治性肝病、代谢性肝病的细胞替代治疗提供了源源不断的种子细胞来源,但是其诱导分化的低效率及致瘤风险一直是难以解决的关键问题[1-2]。微小RNA(microRNA,miRNA)是广泛存在于真核

【参考文献】

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本文编号：987073