蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12负性调控心脏HERG钾通道电流

发布时间：2017-10-07 22:05

  本文关键词：蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12负性调控心脏HERG钾通道电流

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【摘要】：目的研究蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12(PTPN12)对心脏HERG钾通道电流的调控作用。方法(1)质粒构建和基因转染:PCR技术构建各种质粒,应用脂质体将各种质粒转染HEK293细胞,经G418筛选获得稳定表达的细胞株;(2)应用抗PTPN12抗体进行Western blotting分析检测PTPN12的表达;(3)细胞电生理检测:应用膜片钳技术检测单独表达HERG组(HEK293/HERG细胞)、PTPN12过度表达组(将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERG细胞)、PAO处理组(PTPN12/HERG组基础上加入抑制剂PAO)、herg突变组(将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERGY327A-Y700A-Y845A细胞株)的HERG钾通道电流。结果(1)成功构建herg突变质粒和pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒,并获得稳定表达的细胞株;(2)共转染pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒的HEK293/HERG细胞在荧光显微镜下可观察到PTPN12-RFP在细胞中的表达,Western blotting可检测到PTPN12的表达;(3)PTPN12过度表达组脉冲电流密度明显低于对照组(P0.01),PAO处理组和herg突变组电流密度明显高于PTPN12/HERG组(P0.01)。结论 PTPN12对心脏HERG钾通道电流具有明显负性调控作用,其可能机制是PTPN12减弱了HERG钾通道酪氨酸磷酸化程度。这一发现有助于更深刻理解HERG钾通道调控机制和长QT综合征发病机制。
【作者单位】： 广东省心血管病研究所;广东省人民医院心内科;
【关键词】： 长QT综合征 HERG钾通道 蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型 膜片钳技术
【基金】：国家自然科学基金(81070151) 广东省自然科学基金(S2012010009324)~~
【分类号】：R331
【正文快照】： 由人类herg(Human ether-a-go-go-related gene)所编码心脏HERG钾通道属于电压依赖性钾通道,该通道 介导快速激活延迟整流钾电流。herg基因突变和某些药物阻滞HERG钾通道均可引起长QT综合征(LQTs)[1]。在心脏离子通道的众多调控因素中,通道的磷酸化程度发挥了极其重要的作用,

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本文编号：990309