携带GFP的慢病毒感染人脐带间充质干细胞及其对Oct4表达的影响

发布时间：2017-10-09 08:50

  本文关键词：携带GFP的慢病毒感染人脐带间充质干细胞及其对Oct4表达的影响

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【摘要】：目的将携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒感染人脐带间充质干细胞(hUCMSCs),并观察其对Oct4表达的影响。方法采用组织块贴壁法分离、培养hUCMSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志物;利用含GFP的慢病毒,以不同感染复数(MOI值)感染hUCMSCs,荧光显微镜下观察GFP的表达情况,并用流式细胞仪检测GFP的阳性率,确定最佳MOI值;实验分为未感染组和感染组;MTT法检测感染慢病毒后对细胞增殖的影响;GFP慢病毒感染hUCMSCs后体外持续培养2周和8周,采用定量RT-PCR(qRT-PCR)和免疫荧光染色检测细胞中Oct4的表达变化。结果体外培养出的hUCMSCs呈长梭形成纤维细胞样,第3代细胞高表达CD29、CD105和CD90,低表达CD34、CD45;荧光显微镜观察在感染96 h后荧光表达最强;当以MOI=20感染细胞96 h后,GFP阳性率达75%以上;与未感染组相比,MTT显示GFP慢病毒对细胞增殖没有明显影响(P0.05);qRT-PCR检测Oct4在培养2周和8周的细胞中相对表达量分别为0.9075±0.0124和0.8600±0.0135;免疫荧光染色显示Oct4在培养2、8周中均有表达且定位于胞核。结论慢病毒携带的GFP基因能够表达于hUCMSCs中,且不影响Oct4的表达。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院心血管内科;
【关键词】： 绿色荧光蛋白 慢病毒 脐带间充质干细胞 Oct
【基金】：重庆市科委基金(0200060226)
【分类号】：R329
【正文快照】： 脐带来源的人间充质干细胞(human umbilicalcord mesenchymal stem cells,hUCMSC)作为一种具有多向分化潜能的成体干细胞,可分化为心肌细胞[1]、血管内皮细胞[2]、成骨细胞[3]等,是目前研究和应用较多的间充质干细胞之一。八聚体转录因子4(octamer transcription factor 4,Oct

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 周青松;苟欣;何卫阳;张龙波;;慢病毒介导survivin体外转染MSCs及功能测定[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年10期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 齐玉增;苟欣;周青松;杨平;;骨髓间充质干细胞移植在小鼠急性肾损伤肾内的存活与分化情况研究[J];生命科学研究;2011年06期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 赵世斗;OCT4假基因在胶质瘤和乳腺癌中的表达及其意义的研究[D];山东大学;2011年

2 郭晓萍;儿童白血病病人特异性诱导多能干细胞（iPSCs）样细胞株的建立及其生物学特性研究[D];浙江大学;2012年

3 贾勇圣;Oct4对肿瘤干细胞成瘤能力和多向分化潜能的影响[D];北京协和医学院;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 焦洁;人卵巢癌CD24-表型细胞的干细胞特征及上皮-间质转变的体外研究[D];浙江大学;2011年

2 王锐;干细胞基因OCT4蛋白在胃癌细胞内表达意义的研究[D];福建医科大学;2011年

3 付鹤玲;Dicer1及PP2ACα在精子发生减数分裂前期的功能研究[D];南京医科大学;2011年

4 李成华;口腔黏膜间充质干细胞存在及在口腔扁平苔藓中变化的初步研究[D];第四军医大学;2010年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 周青松;苟欣;;小鼠骨髓间充质干细胞的培养、鉴定和Survivin的表达研究[J];生命科学研究;2010年05期

2 江小霞,张毅,李秀森,吴英,于晓Y，

本文编号：999274