选择性雌激素受体调节剂（SERMs）类药物治疗AD的研究

发布时间：2017-10-15 00:22

  本文关键词：选择性雌激素受体调节剂（SERMs）类药物治疗AD的研究

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【摘要】：阿尔茨海默症(AD)严重影响认知能力并损害记忆力。阿尔茨海默病是最常见和最重要的脑变性疾病,且AD的发病率呈逐年显著上升趋势,其中女性发病率为男性发病率的3倍。其发病机理没有阐明,有Aβ学说以及神经兴奋性损伤学说等等。Aβ学说是指脑内β淀粉样蛋白(Aβ)沉积压迫神经导致记忆减退。神经兴奋性学说是认为一些因素引起神经兴奋毒性而导致神经损伤从而使记忆减退。临床上没有能够特异够治疗阿尔茨海默症(AD)的方法,目前在研究的抗AD的药物主要是针对Aβ和tau蛋白过磷酸化,但其临床试验多以失败告终。由于女性绝经后患者发病率高于男性,女性绝经后雌激素明显减少而雌激素能够改善记忆,对患者有一定效果,但是雌激素主要通过结合其受体产生作用,不同组织器官有不同的雌激素受体,因此雌激素在中枢神经系统起作用时能够激动其他组织器官上的受体,如卵巢和子宫产生副作用。而选择性雌激素受体调节剂(SERMs)由于在不同组织有激动或者拮抗作用,使其在激动中枢神经系统受体时并不会激动其他组织上的受体,而减少了雌激素的副作用,因而SERMs成为雌激素的替代药物。基于以上理论,本文选用选择性雌激素类药物作用于体外建立的神经细胞模型,检测药物的作用。而本文所选细胞为SHSY5Y细胞,是一种肿瘤细胞,需要经诱导分化后成为所需要的细胞,因此本文主要包括以下内容:(1)培养SHSY5Y细胞,用无血清、Aβ、谷氨酸等建立未分化时候的细胞损伤模型,用MTT、CCK-8、LDH等实验方法筛选出最佳条件,并检测SERMs类药物雷洛昔芬的保护作用。(2)用RA诱导SHSY5Y细胞分化,并通过细胞形态学观察,western-blot、细胞免疫荧光的方法检测神经细胞特异性蛋白MAP-2的表达来选出最佳的诱导细胞表达的条件。(3)用无血清、Aβ、谷氨酸等处理分化后的细胞建立损伤模型,筛选出最佳条件,并检测雷洛昔芬的保护作用。目前本文已完成未分化及分化后细胞模型的建立工作,并检测出所选药物对体外的细胞模型有一定的保护作用,但是诱导分化的实验中只通过细胞形态学的变化找出合适的条件,但是并没有检测出特定蛋白的表达。
【关键词】：阿尔茨海默症 雌激素 选择性雌激素受体调节剂 β 淀粉样蛋白 谷氨酸 雷洛昔芬
【学位授予单位】：华侨大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 引言9-21
• 1.1 阿尔茨海默症的研究近况9-13
• 1.1.1 阿尔茨海默症的现状9
• 1.1.2 国内外的研究动态9-13
• 1.2 雌激素类药物的研究现状13-15
• 1.2.1 雌激素能改善记忆的可能的作用机制13-14
• 1.2.2 雌激素药物的局限性14-15
• 1.3 选择性雌激素受体调节剂（SERMs）15-16
• 1.4 AD体外模型的建立16-19
• 1.5 本工作的目的及意义19-21
• 第二章 SH-SY5Y细胞无血清模型的建立21-31
• 2.1 实验材料、试剂与仪器21-23
• 2.1.1 实验材料21-22
• 2.1.2 实验仪器22-23
• 2.2 实验步骤23-27
• 2.2.1 SHSY5Y细胞复苏23
• 2.2.2 SHSY5Y细胞换液23-24
• 2.2.3 SHSY5Y细胞传代24
• 2.2.4 SHSY5Y细胞冻存24-25
• 2.2.5 SHSY5Y细胞计数与铺板25-27
• 2.3 实验结果27-28
• 2.4 小结与讨论28-31
• 第三章 全反式维甲酸诱导SH-SY5Y细胞分化31-47
• 3.1 实验材料、试剂与仪器31-37
• 3.1.1 实验材料31-36
• 3.1.2 实验仪器36-37
• 3.2 实验步骤37-41
• 3.2.1 加入RA后细胞形态变化37
• 3.2.2 检测SHSY5Y分化相关蛋白表达37-40
• 3.2.3 细胞免疫荧光40-41
• 3.3 实验结果41-45
• 3.3.1 细胞诱导分化的形态变化41-43
• 3.3.2 诱导分化后神经特异性蛋白的标记43-45
• 3.3.3 细胞免疫荧光结果45
• 3.4 小结与讨论45-47
• 3.4.1 小结45
• 3.4.2 讨论45-47
• 第四章 SERMs类药物的神经保护作用47-59
• 4.1 实验材料、试剂与仪器47-49
• 4.1.1 实验材料47
• 4.1.2 实验试剂47-49
• 4.2 实验步骤49-51
• 4.2.1 未分化SHSY5Y细胞的损伤49-51
• 4.2.2 RA诱导分化后的细胞损伤51
• 4.2.3 药物对细胞损伤的保护作用51
• 4.3 实验结果51-57
• 4.3.1 细胞损伤结果51-53
• 4.3.2 药物对未分化细胞损伤的保护作用53-57
• 4.4 小结与讨论57-59
• 第五章 结论59-61
• 参考文献61-67
• 致谢67-69
• 个人简历69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 吴方建;阿尔茨海默病发病机制及药物治疗[J];医药导报;2004年02期

2 罗增荣,黄绍宽,洪佩贤,陈盛强,柳息洪,燕启江,刘利东,陈柏铭;Alzheimer病与载脂蛋白Eε4等位基因及血脂的关联[J];中国老年学杂志;2003年09期

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本文编号：1034024